公开(公告)号：CN119144472A

公开(公告)日：2024-12-17

申请号：CN202411348518.4

申请日：2024-09-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈修来 ,  顾子蕴 ,  唐永圣 ,  赵春雷 ,  张健

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/52 ,  C12N15/53 ,  C12N15/60 ,  C12N15/31 ,  C12N15/81 ,  C12P7/46 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一株产琥珀酸马克斯克鲁维酵母的构建方法及其应用，属于生物技术领域。本发明通过敲除乙醇代谢路径基因PDC1并在细胞中过表达琥珀酸还原合成路径相关基因，并采用CRISPR‑Cas9技术敲除PDC1基因，采用NHEJ技术实现路径基因在细胞中的过表达，构建了高产琥珀酸的优良菌株。本申请构建的菌株在5L发酵罐中经补料分批发酵培养后，琥珀酸产量达到42.9g/L，转化率达到0.37g/g葡萄糖。本发明构建的菌株在化工、可降解材料及食品领域中具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN118497098A

公开(公告)日：2024-08-16

申请号：CN202410734747.3

申请日：2024-06-07

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈修来 ,  潘静宇 ,  刘立明 ,  刘佳 ,  高聪 ,  吴静 ,  宋伟 ,  胡贵鹏

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N15/90 ,  C12P7/46 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建方法及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过转录组分析筛选，得到有效靶点aaeA，进一步通过在E.coli FMME‑N‑5中过表达aaeA基因，采用启动子、RBS以及拷贝数优化调节aaeA的表达水平，构建了工程菌株E.coli FMME‑N‑5‑aaeA。将本发明构建的重组大肠杆菌采用两阶段发酵策略发酵72h，琥珀酸产量可达150.76g/L，全阶段琥珀酸得率达0.90g/g葡萄糖，生产强度2.09g/L/h，副产物甲酸不积累，乳酸、乙酸低于5g/L，菌株不含质粒，不存在质粒丢失的风险，发酵时不加入抗生素，具有应用于工业化生产的潜力。

公开(公告)号：CN116333956B

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202310222300.3

申请日：2023-03-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈修来 ,  赵阔 ,  于海浪 ,  刘立明 ,  高聪 ,  刘佳

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/04 ,  C12N9/12 ,  C12N9/88 ,  C12N9/06 ,  C12N9/10 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12P13/08 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒状杆菌及采用谷氨酸棒状杆菌发酵生产L‑缬氨酸的方法。本发明通过对谷氨酸棒状杆菌的筛选诱变，并对其进行改造，最终构建了一株可用于工业生产的谷氨酸棒状杆菌，最终发酵罐产量达到51.6g/L。并对发酵培养基的中维生素B3进行优化，提高了L‑缬氨酸的产量，最终发酵产量达到了68.2g/L。本发明采用两阶段发酵，降低成本的同时提高了L‑缬氨酸的产量和转化率。最终在5L发酵罐上发酵48h，L‑缬氨酸产量、转化率和生产强度分别达到了100g/L、44％和2.08g/L/h。本发明所得菌株潜力巨大，且发酵生产L‑缬氨酸的方法工艺操作简单易行、培养基成本低廉，适用于工业化生产。

公开(公告)号：CN117965492A

公开(公告)日：2024-05-03

申请号：CN202410059317.6

申请日：2024-01-15

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴静 ,  王晶 ,  刘立明 ,  魏婉清 ,  宋伟 ,  闻建 ,  周怡雯 ,  陈修来 ,  刘佳 ,  高聪

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种重组酸性磷酸酶突变体及其在合成磷酸吡哆醛中的应用，属于生物工程技术领域。所述酸性磷酸酶突变体，是将酸性磷酸酶的第57位、第58位、第59位、第60位、第91位、第96位和第124位的氨基酸中的一个或多个进行突变得到的。与野生型酸性磷酸酶StAPase相比，突变体比酶活提高3.5倍，催化效率提升4.87倍。本发明先通过构建重组酸性磷酸酶，以吡哆醇盐酸盐为底物，生成中间产物磷酸吡哆醇；再以磷酸吡哆醇为底物，生产最终产物磷酸吡哆醛，中间产物吡哆醇的转化率可达62％，极大的提升了本路径限速步骤的转化率，提高了单位催化剂的生产能力和催化剂的反应效率，降低了反应的成本。

公开(公告)号：CN116814517A

公开(公告)日：2023-09-29

申请号：CN202310782457.1

申请日：2023-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈修来 ,  干雅梅 ,  刘立明 ,  吴静 ,  高聪 ,  刘佳

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12P7/40 ,  C12P7/56 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种可光驱动还原二氧化碳的大肠杆菌及其在有机酸生产中的应用，属于生物技术领域。本发明通过筛选金属离子转运蛋白、量子点种类以及甲酸脱氢酶，在宿主中过表达编号为UniProt:P0A769的转运蛋白EcMntH编码基因，于含有铅源的培养基中培养合成量子点PbS，并异源表达核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的甲酸脱氢酶FDH编码基因，得到了一种能够利用光高效驱动二氧化碳还原的重组菌株，以该菌株作为底盘菌株进行基因工程改造，可用于制备多种有机酸，为有机酸的绿色生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN116426455A

公开(公告)日：2023-07-14

申请号：CN202310607545.8

申请日：2023-05-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘立明 ,  王明 ,  高聪 ,  刘佳 ,  陈修来 ,  宋伟 ,  魏婉清 ,  吴静

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种重组大肠杆菌及其构建方法与其在生产3‑脱氢莽草酸中的应用。本发明所述重组大肠杆菌在大肠杆菌宿主菌中，敲除3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE、负调控转录抑制因子tyrR、乙酸激酶基因ackA、丙酮酸脱氢酶基因poxB和奎尼酸脱氢酶基因YdiB，并过量表达磷酸烯醇式丙酮酸合酶ppsA、转酮醇酶tktA和转醛缩酶talA、DHQ合酶aroB、3‑脱氢奎尼酸脱水酶aroD和抗反馈抑制的3‑脱氧‑D‑阿拉伯庚酮糖‑7‑磷酸(DAHP)合成酶基因aroGFBR。本发明发酵生产3‑脱氢莽草酸的工艺操作简单易行、培养基成本低廉，适用于工业化生产。

公开(公告)号：CN116333956A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202310222300.3

申请日：2023-03-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈修来 ,  赵阔 ,  于海浪 ,  刘立明 ,  高聪 ,  刘佳

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/04 ,  C12N9/12 ,  C12N9/88 ,  C12N9/06 ,  C12N9/10 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12P13/08 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒状杆菌及采用谷氨酸棒状杆菌发酵生产L‑缬氨酸的方法。本发明通过对谷氨酸棒状杆菌的筛选诱变，并对其进行改造，最终构建了一株可用于工业生产的谷氨酸棒状杆菌，最终发酵罐产量达到51.6g/L。并对发酵培养基的中维生素B3进行优化，提高了L‑缬氨酸的产量，最终发酵产量达到了68.2g/L。本发明采用两阶段发酵，降低成本的同时提高了L‑缬氨酸的产量和转化率。最终在5L发酵罐上发酵48h，L‑缬氨酸产量、转化率和生产强度分别达到了100g/L、44％和2.08g/L/h。本发明所得菌株潜力巨大，且发酵生产L‑缬氨酸的方法工艺操作简单易行、培养基成本低廉，适用于工业化生产。

公开(公告)号：CN116286701A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310078769.4

申请日：2023-02-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴静 ,  武耀运 ,  何志震 ,  陶金阳 ,  李春旺 ,  马腾飞 ,  闫昕 ,  苗登路 ,  刘立明 ,  宋伟 ,  魏婉清 ,  周怡雯 ,  陈修来 ,  刘佳 ,  高聪

IPC: C12N9/06 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P11/00 ,  C12P7/40 ,  C12P7/52 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种不透明红球菌L‑氨基酸氧化酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明克服了野生型RoLAAO催化性能差的局限，通过麦芽糖蛋白工程及组合突变设计出突变体RoLAAOY226H/D227H/Y371L/A466C/W467A，其对五种选定底物催化效率为野生型的9.2‑82.8倍，能够以L‑氨基酸(L‑Leu、L‑Ile、L‑Met、L‑Val及L‑Phe)为底物规模化制备系列α‑酮酸(α‑酮亮氨酸、α‑酮异亮氨酸、α‑酮蛋氨酸、α‑酮缬氨酸及α‑苯丙酮酸)，对应产量>101g/L，转化率>95％，单位菌体生产α‑酮酸的能力在5.1‑5.5g/g，为多种α‑酮酸的工业化生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN116083518A

公开(公告)日：2023-05-09

申请号：CN202211096327.4

申请日：2022-09-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴静 ,  李昕 ,  刘立明 ,  宋伟 ,  周怡雯 ,  陈修来 ,  刘佳 ,  高聪

IPC: C12Q1/32 ,  C12N9/06 ,  C12N15/53 ,  C12P13/00

Abstract: 本发明公开了一种高通量筛选亮氨酸脱氢酶的方法及一种亮氨酸脱氢酶，利用本发明的方法对亮氨酸脱氢酶BtLDH进行蛋白质工程改造，并使用高通量筛选的方法，在96孔板中培养含亮氨酸脱氢酶BtLDH的重组菌株及菌株突变体，并进行转接诱导，离心收集含苏云金芽孢杆菌的亮氨酸脱氢酶BtLDH的细胞来转化2‑酮丁酸转化产生L‑2‑氨基丁酸，并利用2,4‑二硝基氟苯(DNFB)显色后于500nm处读取吸光值，并将吸光值大的菌株进行摇瓶验证，在短时间内成功筛选出各亮氨酸脱氢酶，其中最优突变体A262S产L‑2‑氨基丁酸9.22g/L，与野生型相比L‑2‑氨基丁酸产量提高3.04g/L。

公开(公告)号：CN115725669A

公开(公告)日：2023-03-03

申请号：CN202211097246.6

申请日：2022-09-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴静 ,  姜旭玲 ,  刘立明 ,  宋伟 ,  周怡雯 ,  陈修来 ,  刘佳 ,  高聪

IPC: C12P17/10 ,  C12N9/00 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种吡咯烷酮的制备方法，本发明提供一种利用肉碱辅酶A连接酶CaiC催化γ‑氨基丁酸制备吡咯烷酮的方法。所述肉碱辅酶A连接酶CaiC的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。该连接酶具有催化γ‑氨基丁酸环化生成吡咯烷酮的活性。本发明提供的肉碱辅酶A连接酶以γ‑氨基丁酸为底物时24h吡咯烷酮的产量为3.26g/L，摩尔产率可达39.53％，减少了生产周期，提高了吡咯烷酮的产量，加快了酶转化法生产吡咯烷酮的工业化进程。