公开(公告)号：CN117683759B

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202311752427.2

申请日：2023-12-19

申请人： 江南大学

发明人： 刘立明 ,  王明 ,  高聪 ,  陈修来 ,  胡贵鹏 ,  刘佳 ,  魏婉清 ,  宋伟 ,  吴静

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体及产原儿茶酸的重组大肠杆菌，突变体ApAroZR363A的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过出发序列的第363位精氨酸突变为丙氨酸得到；本发明还基于该突变体构建了一株重组大肠杆菌，具体地：通过阻断碳流从3‑脱氢莽草酸流向下游莽草酸，敲除了大肠杆菌中3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE成功构建了一株高产3‑脱氢莽草酸的底盘菌株，并引入具有抵抗产物抑制的高活性3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体ApAroZR363A在底盘菌株中构建原儿茶酸生物合成路径，最终建立了一个高效生物合成原儿茶酸的大肠杆菌重组菌株。

公开(公告)号：CN117683759A

公开(公告)日：2024-03-12

申请号：CN202311752427.2

申请日：2023-12-19

申请人： 江南大学

发明人： 刘立明 ,  王明 ,  高聪 ,  陈修来 ,  胡贵鹏 ,  刘佳 ,  魏婉清 ,  宋伟 ,  吴静

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体及产原儿茶酸的重组大肠杆菌，突变体ApAroZR363A的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过出发序列的第363位精氨酸突变为丙氨酸得到；本发明还基于该突变体构建了一株重组大肠杆菌，具体地：通过阻断碳流从3‑脱氢莽草酸流向下游莽草酸，敲除了大肠杆菌中3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE成功构建了一株高产3‑脱氢莽草酸的底盘菌株，并引入具有抵抗产物抑制的高活性3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体ApAroZR363A在底盘菌株中构建原儿茶酸生物合成路径，最终建立了一个高效生物合成原儿茶酸的大肠杆菌重组菌株。

公开(公告)号：CN116426455B

公开(公告)日：2024-05-24

申请号：CN202310607545.8

申请日：2023-05-26

申请人： 江南大学

发明人： 刘立明 ,  王明 ,  高聪 ,  刘佳 ,  陈修来 ,  宋伟 ,  魏婉清 ,  吴静

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

摘要： 本发明涉及一种重组大肠杆菌及其构建方法与其在生产3‑脱氢莽草酸中的应用。本发明所述重组大肠杆菌在大肠杆菌宿主菌中，敲除3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE、负调控转录抑制因子tyrR、乙酸激酶基因ackA、丙酮酸脱氢酶基因poxB和奎尼酸脱氢酶基因YdiB，并过量表达磷酸烯醇式丙酮酸合酶ppsA、转酮醇酶tktA和转醛缩酶talA、DHQ合酶aroB、3‑脱氢奎尼酸脱水酶aroD和抗反馈抑制的3‑脱氧‑D‑阿拉伯庚酮糖‑7‑磷酸(DAHP)合成酶基因aroGFBR。本发明发酵生产3‑脱氢莽草酸的工艺操作简单易行、培养基成本低廉，适用于工业化生产。

公开(公告)号：CN118581023A

公开(公告)日：2024-09-03

申请号：CN202410856246.2

申请日：2024-06-28

申请人： 江南大学

发明人： 吴静 ,  王翔鹤 ,  胡贵鹏 ,  刘立明 ,  盛琦 ,  李振栋 ,  王明

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌及其构建方法与其在生产3‑脱氢莽草酸中的应用，属于生物工程技术领域。本发明所述重组大肠杆菌，以大肠杆菌SA01为出发菌株，敲除了3‑脱氢莽草酸脱氢酶编码基因aroE，负调控转录抑制因子编码基因tyrR和磷酸烯醇式丙酮酸磷酸转移酶编码基因ptsH，并过量半乳糖透性酶基因galP和抗反馈抑制的DHAP合成酶编码基因aroFfbr，最终得到的重组菌株发酵40h，3‑脱氢莽草酸产量达到了117g/L，对葡萄糖得率达到0.52g/g。本发明发酵生产3‑脱氢莽草酸的工艺操作简单易行，无需额外添加抗生素，周期短且得率高，培养基成本低廉，适用于工业化生产。

公开(公告)号：CN116426455A

公开(公告)日：2023-07-14

申请号：CN202310607545.8

申请日：2023-05-26

申请人： 江南大学

发明人： 刘立明 ,  王明 ,  高聪 ,  刘佳 ,  陈修来 ,  宋伟 ,  魏婉清 ,  吴静

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

摘要： 本发明涉及一种重组大肠杆菌及其构建方法与其在生产3‑脱氢莽草酸中的应用。本发明所述重组大肠杆菌在大肠杆菌宿主菌中，敲除3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE、负调控转录抑制因子tyrR、乙酸激酶基因ackA、丙酮酸脱氢酶基因poxB和奎尼酸脱氢酶基因YdiB，并过量表达磷酸烯醇式丙酮酸合酶ppsA、转酮醇酶tktA和转醛缩酶talA、DHQ合酶aroB、3‑脱氢奎尼酸脱水酶aroD和抗反馈抑制的3‑脱氧‑D‑阿拉伯庚酮糖‑7‑磷酸(DAHP)合成酶基因aroGFBR。本发明发酵生产3‑脱氢莽草酸的工艺操作简单易行、培养基成本低廉，适用于工业化生产。