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公开(公告)号：CN118667893A
公开(公告)日：2024-09-20
申请号：CN202410818360.6
申请日：2024-06-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种利用CO2合成丙酮酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过路径设计，及热力学分析，获得了包含将CO2转化为甲醛的第一反应模块、将甲醛转化为二羟基丙酮的第二反应模块和将二羟基丙酮转化为丙酮酸的第三反应模块的丙酮酸合成路径。按照该合成路径通过一锅法催化18h后，从反应体系中检测到0.11g/L的丙酮酸。将该路径引入大肠杆菌构建获得的菌株TD‑F1胞内可检测到ADRP中间代谢物二羟基丙酮(m+3)、丙酮醛(m+3)和丙酮酸(m+3)，其相对丰度分别达到20.8％、18.4％和14.9％，成功实现了以CO2为底物合成丙酮酸。
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公开(公告)号：CN118581023A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410856246.2
申请日：2024-06-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌及其构建方法与其在生产3‑脱氢莽草酸中的应用，属于生物工程技术领域。本发明所述重组大肠杆菌，以大肠杆菌SA01为出发菌株，敲除了3‑脱氢莽草酸脱氢酶编码基因aroE，负调控转录抑制因子编码基因tyrR和磷酸烯醇式丙酮酸磷酸转移酶编码基因ptsH，并过量半乳糖透性酶基因galP和抗反馈抑制的DHAP合成酶编码基因aroFfbr，最终得到的重组菌株发酵40h，3‑脱氢莽草酸产量达到了117g/L，对葡萄糖得率达到0.52g/g。本发明发酵生产3‑脱氢莽草酸的工艺操作简单易行，无需额外添加抗生素，周期短且得率高，培养基成本低廉，适用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN116904381B
公开(公告)日：2024-07-12
申请号：CN202310951198.0
申请日：2023-07-31
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一株产己二酸的重组大肠杆菌的构建及其应用，属于生物技术领域。本发明将大肠杆菌进行改造，敲除了3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE、负调控转录抑制因子tyrR、乙酸激酶基因ackA、丙酮酸脱氢酶基因poxB和奎尼酸脱氢酶基因YdiB，过表达了aroB、aroD、aroGFBR、ppsA、tktA、talA、GsQOR和gdh，并通过RBS序列调控己二酸生产的靶点基因片段烯酸还原酶编码基因GsQOR和葡萄糖脱氢酶编码基因gdh的表达强度，再过表达调控顺,顺‑粘康酸的靶点基因aroZ、aroY和catA，最后经发酵放大验证己二酸产量，在48h达5.3g/L。本发明为从顺,顺‑粘康酸生产己二酸提供了新方法，具有较好发展前景，有利于用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN116694591B
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202310775863.5
申请日：2023-06-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种1,3‑丙二醇脱氢酶突变体及产1,3‑丙二醇的克雷伯氏菌，属于生物技术领域。本发明以Klebsiella pneumoniae ATCC 13883为出发菌株，通过敲除编码α‑乙酰乳酸脱羧酶的budA基因，编码d‑乳酸脱氢酶LDH的ldhA基因，编码乙醛脱氢酶ALDH的aldA基因，PTS转运系统关键酶编码基因crr，过表达甘油脱水酶基因dhaB和苹果酸酶基因maeB、来自大肠杆菌的醛基还原酶基因yqhD和突变后的1,3‑丙二醇脱氢酶dhaT，获得了重组克雷伯氏菌KP‑FMME；利用此重组菌株进行5L发酵罐发酵，经发酵条件优化，重组克雷伯氏菌KP‑FMME以甘油为原料发酵48h，可生产130g/L的1,3‑丙二醇，具有十分广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN118109428A
公开(公告)日：2024-05-31
申请号：CN202410240505.9
申请日：2024-03-04
摘要： 本发明公开了一种细胞色素P450酶突变体及其制备方法和应用，本发明提供了细胞色素P450酶的单突变体L373T和双突变体L373T/G211H来提高对香豆酸的产量，所述P450酶突变体相对野生型，尤其以组合突变G211H/L373T催化水平更高，且保持了专一的立体选择性，可以以反式肉桂酸为底物制备对香豆酸。
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公开(公告)号：CN118028201A
公开(公告)日：2024-05-14
申请号：CN202410164562.3
申请日：2024-02-05
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种提高硫酸软骨素6‑O‑磺基转移酶可溶性表达及酶活的方法，属于生物工程技术领域。本发明首次实现了海洋生物来源的CHST15在原核宿主中异源表达，并通过与促溶标签共表达的策略提高了CHST15可溶性表达量，可使CHST15的胞内酶活提高了2.8倍，达到125.1U/mL。本发明还优化了重组菌的表达条件，将磺基转移酶可溶性表达量进一步提高至134.8U/mL。本方法只通过共表达的方式就实现了磺基转移酶酶活的大幅度提高，并且不影响酶的结构与后续纯化，为酶法生产硫酸软骨素E提供了有效方法。
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公开(公告)号：CN117965655A
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202410034625.3
申请日：2024-01-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种化学酶法环氧化降冰片烯合成环氧降冰片烷的方法，属于生物工程技术领域。本发明使用了一种具有过水解酶活性的酰基转移酶，并设计了一种合成环氧降冰片烷的新技术。本发明采用双相体系，以含有NBE的乙酸乙酯为有机相，以含有酰基转移酶PlAcT的缓冲液为水相，有机相与水相等比例混合反应进行催化反应。本发明提供的化学酶法环氧化降冰片烯生产环氧降冰片烷产量可达29.6g/L，摩尔转化率50.6％。该过程温和、高效，具有良好的工业前景。
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公开(公告)号：CN116694591A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202310775863.5
申请日：2023-06-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种1,3‑丙二醇脱氢酶突变体及产1,3‑丙二醇的克雷伯氏菌，属于生物技术领域。本发明以Klebsiella pneumoniae ATCC 13883为出发菌株，通过敲除编码α‑乙酰乳酸脱羧酶的budA基因，编码d‑乳酸脱氢酶LDH的ldhA基因，编码乙醛脱氢酶ALDH的aldA基因，PTS转运系统关键酶编码基因crr，过表达甘油脱水酶基因dhaB和苹果酸酶基因maeB、来自大肠杆菌的醛基还原酶基因yqhD和突变后的1,3‑丙二醇脱氢酶dhaT，获得了重组克雷伯氏菌KP‑FMME；利用此重组菌株进行5L发酵罐发酵，经发酵条件优化，重组克雷伯氏菌KP‑FMME以甘油为原料发酵48h，可生产130g/L的1,3‑丙二醇，具有十分广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN114085801B
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202111434507.4
申请日：2021-11-29
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一株生产L‑色氨酸的重组大肠杆菌及其应用。本发明的重组大肠杆菌，命名为大肠杆菌(Escherichia coli)FMME‑TRPD‑A，于2021年11月08日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC M 20211388。本发明的Escherichia coli FMME‑TRPD‑A可抵抗高浓度L‑色氨酸的反馈抑制，且具有较好的传代稳定性，在传代12代之后，其L‑色氨酸的生产能力均能够稳定在一定水平，通过过表达色氨酸合成路径中的关键酶，以提高色氨酸产量；在摇瓶水平上发酵生产L‑色氨酸产量达3.01g/L，在发酵罐水平上发酵生产L‑色氨酸产量达55.2g/L。本发明发酵生产L‑色氨酸的方法工艺操作简单易行、培养基成本低廉，适用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN114990013B
公开(公告)日：2023-08-04
申请号：CN202210574762.7
申请日：2022-05-24
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N1/20 , C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/53 , C12N15/52 , C12N15/60 , C12N15/54 , C12P13/08 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一株固定CO2产L‑苏氨酸的大肠杆菌工程菌及应用，属于发酵领域。本发明筛选获得了一株具有L‑苏氨酸生产能力的大肠杆菌FMME‑AA5，在此基础上通过游离过表达甲酸脱氢酶、乙酰辅酶A合成酶、酰化乙醛脱氢酶、甲醛裂合酶、二羟基丙酮激酶和亚磷酸脱氢酶，获得菌株大肠杆菌E.coli FMME‑AA5‑A。将构建的大肠杆菌工程菌用于发酵生产L‑苏氨酸，以CO2和葡萄糖作为共底物厌氧发酵42h，L‑苏氨酸产量可达145.0g/L，葡萄糖得率相比原始菌株的0.58g/g可提高至0.65g/g。
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