本发明公开了一株固定CO2产L‑苏氨酸的大肠杆菌工程菌及应用，属于发酵领域。本发明筛选获得了一株具有L‑苏氨酸生产能力的大肠杆菌FMME‑AA5，在此基础上通过游离过表达甲酸脱氢酶、乙酰辅酶A合成酶、酰化乙醛脱氢酶、甲醛裂合酶、二羟基丙酮激酶和亚磷酸脱氢酶，获得菌株大肠杆菌E.coli FMME‑AA5‑A。将构建的大肠杆菌工程菌用于发酵生产L‑苏氨酸，以CO2和葡萄糖作为共底物厌氧发酵42h，L‑苏氨酸产量可达145.0g/L，葡萄糖得率相比原始菌株的0.58g/g可提高至0.65g/g。