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公开(公告)号：CN109810157B
公开(公告)日：2021-05-25
申请号：CN201811465044.6
申请日：2018-12-03
摘要： 本发明公开了一种基于2‑(苯并噻唑‑2'‑基)‑4‑溴苯酚的β‑葡萄糖醛酸苷酶沉淀型荧光底物合成方法。该合成方法包括以下三步反应：1)糖基化反应；2)芳环化反应；3)脱保护基反应。该合成方法中每一步反应产率均可达中等以上，最高超过90％，价格或制备成本相对高的物料反应转化率相对较高，三步总产率可达37％，而且反应条件温和，易于实施。同时该合成方法中的糖基化反应步骤和脱保护基反应步骤可应用于以4‑甲基伞形酮为糖基受体合成常见荧光底物4‑甲基伞形酮基‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷，两步反应产率分别可达51％、89％，总产率可达约45％。
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公开(公告)号：CN109810157A
公开(公告)日：2019-05-28
申请号：CN201811465044.6
申请日：2018-12-03
摘要： 本发明公开了一种基于2-(苯并噻唑-2'-基)-4-溴苯酚的β-葡萄糖醛酸苷酶沉淀型荧光底物合成方法。该合成方法包括以下三步反应：1)糖基化反应；2)芳环化反应；3)脱保护基反应。该合成方法中每一步反应产率均可达中等以上，最高超过90％，价格或制备成本相对高的物料反应转化率相对较高，三步总产率可达37％，而且反应条件温和，易于实施。同时该合成方法中的糖基化反应步骤和脱保护基反应步骤可应用于以4-甲基伞形酮为糖基受体合成常见荧光底物4-甲基伞形酮基-β-D-葡萄糖醛酸苷，两步反应产率分别可达51％、89％，总产率可达约45％。
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公开(公告)号：CN107475209A
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201710640633.2
申请日：2017-07-31
CPC分类号： C12N9/0069 , C12N15/815 , C12Y113/12007
摘要： 本发明公开了一种荧光素酶的制备方法，本发明方法包括：荧光素酶基因的克隆与表达载体的构建、荧光素酶表达载体转化毕赤酵母和筛选转化子、荧光素酶的表达及粗酶液的提取、荧光素酶的分离和纯化。本发明荧光素酶的制备方法简便、高效，在菌体培养过程中，具有培养条件要求简单、无需添加抗生素维持基因的稳定性、诱导剂成本低、培养周期短等优点。本发明制备方法可生产大小为70kDa且带有α-因子分泌肽的融合荧光素酶。本发明制备方法中，胞内胞外的粗酶液均具有较好的酶活性，且粗酶纯化后的比活可达7.0×108RLU/mg，摇瓶发酵产量可达到48mg/L，为荧光素酶的大量生产提供了新的方法，具有良好的应用前景和市场价值。
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公开(公告)号：CN109797232B
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN201910095638.0
申请日：2019-01-31
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6869 , C12Q1/04 , C12R1/01
摘要： 本发明公开了一种丙二酸盐克罗诺杆菌CRISPR分型方法。本方法通过对丙二酸盐克罗诺杆菌的四种CRISPR分子进行DNA测序，提取序列中的间隔序列，根据几者的间隔序列组合确定丙二酸盐克罗诺杆菌的CRISPR型别。本发明方法简单、快速、低成本、分辨率高于MLST分型方法，无环境污染，对实验室设备要求低，且CRISPR分子保存有历史侵染的噬菌体及质粒等诸多信息，可联合数据库实现全国甚至全球标准化分子溯源，适合推广至食品、检验检疫等领域。
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公开(公告)号：CN110093392A
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201910272325.8
申请日：2019-04-04
摘要： 本发明公开了一种四霉素A高产菌株YB101及其筛选方法和发酵生产方法。本发明对化学诱变复合紫外诱变处理后的大量菌株进行筛选时，利用多孔板培养技术并结合酶标仪检测结合于一体的简便、快速、精准、高效的高通量筛选技术应用于筛选高产目标产物的活性菌株，从而得到高产TMA活性菌株。本发明因此能够大大减轻工作量，提高筛选效率，并且操作程序简单，方法稳定，重现性好。在发酵培养过程中，利用优化的发酵条件，向发酵培养液中加入甘油，其最佳添加量的体积比为8.0％，用此含有甘油的发酵培养液对白色链霉菌进行发酵培养，通过优化发酵条件，最终检测TMA在发酵液中的产量为960.0μg/mL，相比菌株YB101的产量385.0μg/mL，提高了2.5倍。
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公开(公告)号：CN110093392B
公开(公告)日：2022-12-02
申请号：CN201910272325.8
申请日：2019-04-04
摘要： 本发明公开了一种四霉素A高产菌株YB101及其筛选方法和发酵生产方法。本发明对化学诱变复合紫外诱变处理后的大量菌株进行筛选时，利用多孔板培养技术并结合酶标仪检测结合于一体的简便、快速、精准、高效的高通量筛选技术应用于筛选高产目标产物的活性菌株，从而得到高产TMA活性菌株。本发明因此能够大大减轻工作量，提高筛选效率，并且操作程序简单，方法稳定，重现性好。在发酵培养过程中，利用优化的发酵条件，向发酵培养液中加入甘油，其最佳添加量的体积比为8.0％，用此含有甘油的发酵培养液对白色链霉菌进行发酵培养，通过优化发酵条件，最终检测TMA在发酵液中的产量为960.0μg/mL，相比菌株YB101的产量385.0μg/mL，提高了2.5倍。
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公开(公告)号：CN109797232A
公开(公告)日：2019-05-24
申请号：CN201910095638.0
申请日：2019-01-31
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6869 , C12Q1/04 , C12R1/01
摘要： 本发明公开了一种丙二酸盐克罗诺杆菌CRISPR分型方法。本方法通过对丙二酸盐克罗诺杆菌的四种CRISPR分子进行DNA测序，提取序列中的间隔序列，根据几者的间隔序列组合确定丙二酸盐克罗诺杆菌的CRISPR型别。本发明方法简单、快速、低成本、分辨率高于MLST分型方法，无环境污染，对实验室设备要求低，且CRISPR分子保存有历史侵染的噬菌体及质粒等诸多信息，可联合数据库实现全国甚至全球标准化分子溯源，适合推广至食品、检验检疫等领域。
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公开(公告)号：CN110042142A
公开(公告)日：2019-07-23
申请号：CN201811457345.4
申请日：2018-11-30
IPC分类号： C12Q1/10
摘要： 本发明公开了一种用于检测大肠杆菌O157与非O157大肠杆菌的显色培养基。所述的显色培养基含有两种能产生不同颜色信号的显色底物和一种不显色但能产生非蓝色荧光信号的荧光底物；显色底物和荧光底物中除了含有β-葡萄糖醛酸苷酶底物和β-半乳糖苷酶底物外，还至少含有β-葡萄糖苷酶底物、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶底物、纤维二糖苷酶底物这三种所产颜色或荧光信号相同或相近底物中的一种底物。本发明提供的显色培养基对于更多的E.coli O157、non-O157 E.coli以及非大肠杆菌，均能给出良好的检测特异性。
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公开(公告)号：CN111118182B
公开(公告)日：2022-06-14
申请号：CN201911395079.1
申请日：2019-12-30
摘要： 发明提供了一组用于鉴别常见血清型单核增生李斯特菌特异性新分子检测靶标，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～13所示。所述靶标能鉴别不同型别的单核增生李斯特菌，例如谱系型Ⅰ、谱系型Ⅱ、谱系型Ⅲ、血清组Ⅰ.1、血清组Ⅰ.2、血清组Ⅱ.1、血清组Ⅱ.2、血清型4a、血清型4c。本发明还提供常见血清型单核增生李斯特菌的检测方法，该方法针对所述13个特异靶标分子设计特异性引物，对PCR扩增产物进行电泳，通过电泳结果直接判定检测样本中是否含有常见的血清型单核增生李斯特菌。
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公开(公告)号：CN112877448B
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN202011615711.1
申请日：2020-12-30
发明人： 丁郁 , 吴清平 , 王涓 , 相欣然 , 张菊梅 , 薛亮 , 陈谋通 , 吴诗 , 曾海燕 , 张友雄 , 韦献虎 , 庞锐 , 雷涛 , 叶青华 , 杨小鹃 , 张淑红 , 陈惠元 , 于鹏飞 , 余树波 , 陈鲁
摘要： 本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及5株具有我国自主知识产权的、符合国内传播规律的蜡样芽胞杆菌标准菌株，可用作食品、药品、临床检验等不同领域的标准参考菌株。其保藏号分别为：GDMCC 60865、GDMCC 60866、GDMCC 60867、GDMCC 60868和GDMCC 60869。5株标准菌株具有典型的生理生化特征，且样品来源、遗传背景、耐药性、毒力基因等信息清晰，完全满足食品、药品、临床检验方面对于标准菌株的要求。本发明还涉及一组用于检测、鉴别上述5株标准菌株的特异性靶标基因以及对应的PCR引物。最后，本发明还提供了一种存活率高、特异性的蜡样芽胞杆菌冻干保护剂，可用于本发明标准菌株的长期储存。
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