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公开(公告)号：CN107475209A
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201710640633.2
申请日：2017-07-31
Applicant: 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) , 广东环凯微生物科技有限公司
CPC classification number: C12N9/0069 , C12N15/815 , C12Y113/12007
Abstract: 本发明公开了一种荧光素酶的制备方法，本发明方法包括：荧光素酶基因的克隆与表达载体的构建、荧光素酶表达载体转化毕赤酵母和筛选转化子、荧光素酶的表达及粗酶液的提取、荧光素酶的分离和纯化。本发明荧光素酶的制备方法简便、高效，在菌体培养过程中，具有培养条件要求简单、无需添加抗生素维持基因的稳定性、诱导剂成本低、培养周期短等优点。本发明制备方法可生产大小为70kDa且带有α-因子分泌肽的融合荧光素酶。本发明制备方法中，胞内胞外的粗酶液均具有较好的酶活性，且粗酶纯化后的比活可达7.0×108RLU/mg，摇瓶发酵产量可达到48mg/L，为荧光素酶的大量生产提供了新的方法，具有良好的应用前景和市场价值。
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公开(公告)号：CN111118182B
公开(公告)日：2022-06-14
申请号：CN201911395079.1
申请日：2019-12-30
Applicant: 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) , 广东环凯生物科技有限公司
Abstract: 发明提供了一组用于鉴别常见血清型单核增生李斯特菌特异性新分子检测靶标，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～13所示。所述靶标能鉴别不同型别的单核增生李斯特菌，例如谱系型Ⅰ、谱系型Ⅱ、谱系型Ⅲ、血清组Ⅰ.1、血清组Ⅰ.2、血清组Ⅱ.1、血清组Ⅱ.2、血清型4a、血清型4c。本发明还提供常见血清型单核增生李斯特菌的检测方法，该方法针对所述13个特异靶标分子设计特异性引物，对PCR扩增产物进行电泳，通过电泳结果直接判定检测样本中是否含有常见的血清型单核增生李斯特菌。
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公开(公告)号：CN111118182A
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201911395079.1
申请日：2019-12-30
Applicant: 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) , 广东环凯生物科技有限公司
Abstract: 发明提供了一组用于鉴别常见血清型单核增生李斯特菌特异性新分子检测靶标，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～13所示。所述靶标能鉴别不同型别的单核增生李斯特菌，例如谱系型Ⅰ、谱系型Ⅱ、谱系型Ⅲ、血清组Ⅰ.1、血清组Ⅰ.2、血清组Ⅱ.1、血清组Ⅱ.2、血清型4a、血清型4c。本发明还提供常见血清型单核增生李斯特菌的检测方法，该方法针对所述13个特异靶标分子设计特异性引物，对PCR扩增产物进行电泳，通过电泳结果直接判定检测样本中是否含有常见的血清型单核增生李斯特菌。
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公开(公告)号：CN111154900B
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN202010068197.8
申请日：2020-01-19
Applicant: 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) , 广东环凯生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了铜绿假单胞菌特异性新分子靶标及其快速检测方法，本发明方法提供了用于鉴别铜绿假单胞菌的3个新特异性分子检测靶标，可根据靶标分子设计相应的引物组，并通过对待检物进行PCR，分析PCR产物的电泳结果即得到是否存在铜绿假单胞菌。与现有技术相比，本发明可用于检测某些生化反应不敏感的菌株，弥补生化鉴定的缺陷，更加具有实用性；同时本发明的检测方法具有操作简单、检测时间短、检测结果特异性好、结果判定简单、成本低等优点，对于铜绿假单胞菌识别具有重要意义。
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公开(公告)号：CN111154900A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010068197.8
申请日：2020-01-19
Applicant: 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) , 广东环凯生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了铜绿假单胞菌特异性新分子靶标及其快速检测方法，本发明方法提供了用于鉴别铜绿假单胞菌的3个新特异性分子检测靶标，可根据靶标分子设计相应的引物组，并通过对待检物进行PCR，分析PCR产物的电泳结果即得到是否存在铜绿假单胞菌。与现有技术相比，本发明可用于检测某些生化反应不敏感的菌株，弥补生化鉴定的缺陷，更加具有实用性；同时本发明的检测方法具有操作简单、检测时间短、检测结果特异性好、结果判定简单、成本低等优点，对于铜绿假单胞菌识别具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102532053A
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201110459845.3
申请日：2011-12-30
Applicant: 广东省微生物研究所 , 广东环凯微生物科技有限公司
IPC: C07D277/62 , C09K11/06
Abstract: 本发明公开了一种高纯度D-荧光素的制备和纯化方法。本发明的制备方法是在充氮气的条件下，2-氰基-6-羟基苯并噻唑与D-半胱氨酸在碱性条件下进行缩合反应，反应完毕后在充氮气的条件下用有一定极性的非水溶性有机溶剂进行萃取，萃取后的水相用盐酸进行酸化，分离沉淀物，沉淀物用溶水性有机溶剂进行洗涤，离心去上清，沉淀物真空干燥，即获得高纯度D-荧光素产品。利用本发明的高纯度D-荧光素的制备方法，可以获得高纯度的D-荧光素产品，并且其D-荧光素的发光比活力较高，得率也高，如果用原料脱甲基产物2-氰基-6-羟基苯并噻唑的纯度(M176≥85％)时，其制备的高纯度的D-荧光素产品的纯度可达90％(HPLC，％Wt)以上，发光比活力达到甚至高于Sigma L9504D-荧光素。
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公开(公告)号：CN100463965C
公开(公告)日：2009-02-25
申请号：CN200610034384.4
申请日：2006-03-17
Applicant: 广东省微生物研究所 , 广东环凯微生物科技有限公司
IPC: C12N9/02
Abstract: 本发明涉及一种规模化提取和纯化天然萤火虫荧光素酶的方法，属生物技术领域。本发明在低温条件下取天然萤火虫虫尾，通过添加酶提取液研磨、离心和硫酸铵沉淀得到粗酶制剂；再通过复溶、透析、超滤、离心和阳离子交换法，可以去除99%的本底，提高荧光素酶的发光比活力50倍以上；进一步经一次分子排阻层析、亲和层析和二次分子排阻层析，即可得到高纯度的荧光素酶，其活力和本底之比可提高到5690倍。本发明解决了一般纯化方法很难达到在去除本底的同时又保持萤光素酶活力的缺陷，提供了一种从天然萤火虫中制备高活力低成本的荧光素酶的方法，适用于规模化生产高活力荧光素酶。
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公开(公告)号：CN103757089A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201410013473.5
申请日：2014-01-10
Applicant: 广东省微生物研究所 , 广东环凯微生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开一种检测饮用水中卫生质量和GMP工厂表面卫生的ATP生物发光试剂、方法及试剂盒。本发明所述的ATP生物发光试剂，包括荧光素酶、D-荧光素、去ATP无菌处理的发光稳定缓冲系统，所述的荧光素酶必须经过纯化，纯化的荧光素酶的活力本底比达到50～3000，其使得ATP生物发光试剂的发光比活力在0.4mL发光体系中，用1×10-7/L？ATP测量时的相对发光对数值达到6.5～7.5，将荧光素酶、D-荧光素、去ATP无菌处理的发光稳定缓冲系统混合后冷冻得到冻干粉。本发明采用高灵敏度稳定发光的ATP生物发光试剂对饮用水卫生质量及GMP工厂表面卫生进行快速检测，在半小时内可以完成取样与快速检测。
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公开(公告)号：CN105289483A
公开(公告)日：2016-02-03
申请号：CN201510117290.2
申请日：2015-03-17
Applicant: 广东省微生物研究所 , 广东环凯微生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开一种去除重金离子的复合生物净化材料的制备方法。将镉抗性菌S5接种于优化的固体培养培养后低温干燥，粉碎过筛，于惰性气体保护的条件下，高温处理后冷却至室温，得到镉去除活性碳，以该镉去除活性碳为载体，制备负载纳米铁锌的多种重金属去除活性碳，即为复合生物净化材料。本发明利用镉抗性菌S5制备的芽孢生物质和复合生物净化材料在一定的剂量范围内可以达到对水溶液中多种重金属离子良好的去除效果，去除率可达到99％以上，因此，可作为低浓度水中单种重金属及镉、锑、铬、铜和锰等多种重金属污染的净化材料。
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公开(公告)号：CN100532568C
公开(公告)日：2009-08-26
申请号：CN200610034385.9
申请日：2006-03-17
Applicant: 广东省微生物研究所 , 广东环凯微生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种利用ATP生物发光法进行微生物数量快速检测的方法及检测试剂盒，快速检测试剂盒包括荧光素酶及其保护剂、D-荧光素、标准ATP、发光检测缓冲液、非细胞ATP去除剂、微生物细胞ATP抽提剂等试剂。应用该检测试剂盒进行微生物数量快速测定的标准方法是通过在选定的生物发光仪和选定的系统中做ATP标准曲线，取对数后得到线性回归方程，将经过非目的ATP去除和微生物ATP抽提的样品液，在同样的仪器和系统中用同一批酶进行ATP生物发光检测，同时做空白对照，得到样品和空白的CPM或RLU值，去除空白后的净相对发光值取对数后，通过建立的回归方程得到样品的ATP浓度，根据细菌、酵母、霉菌和单细胞微藻等微生物的ATP含量可换算成细菌、酵母、霉菌孢子或单细胞微藻的细胞数，或只计相当于细菌数量。
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