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公开(公告)号：CN113832091B
公开(公告)日：2023-02-03
申请号：CN202111218588.4
申请日：2021-10-20
摘要： 一种表达双价杀虫蛋白的苏云金芽孢杆菌工程菌、其构建方法及应用，其基因组中含有苏云金芽孢杆菌携带的天然Bt基因，以及通过同源重组整合在苏云金芽孢杆菌基因组中的外源CpTI基因，外源CpTI基因源于经过密码子优化的豇豆胰蛋白酶抑制剂编码基因CpTI。本发明获得的苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis Bt1.25‑CpTI，于2021年09月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61954。本发明的苏云金芽孢杆菌工程菌菌株中，Bt基因和CpTI基因协同表达，杀虫及抗虫效果均得到增强，有效拓宽生物农药的杀虫谱，能避免或延缓害虫耐受性的产生，提高生物农药防治害虫效果。
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公开(公告)号：CN102286624B
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201110247859.9
申请日：2011-08-26
申请人： 上海市农业科学院
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明公开了一种转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法，包括以下步骤：1)转基因香石竹Moonlite基因组DNA的提取；2)转基因香石竹Moonlite外源基因插入位点左边界旁邻序列的扩增和确认；3)转基因香石竹Moonlite定性PCR检测方法的建立和验证；4)转基因香石竹Moonlite定量PCR检测方法的建立和验证。本发明成功建立了适用于转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法，并验证该检测方法的特异性和灵敏度，为转基因香石竹的进口检测、监管及环境安全评价提供依据。
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公开(公告)号：CN102286624A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110247859.9
申请日：2011-08-26
申请人： 上海市农业科学院
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明公开了一种转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法，包括以下步骤：1)转基因香石竹Moonlite基因组DNA的提取；2)转基因香石竹Moonlite外源基因插入位点左边界旁邻序列的扩增和确认；3)转基因香石竹Moonlite定性PCR检测方法的建立和验证；4)转基因香石竹Moonlite定量PCR检测方法的建立和验证。本发明成功建立了适用于转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法，并验证该检测方法的特异性和灵敏度，为转基因香石竹的进口检测、监管及环境安全评价提供依据。
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公开(公告)号：CN101311275A
公开(公告)日：2008-11-26
申请号：CN200710041264.1
申请日：2007-05-25
申请人： 上海市农业科学院
摘要： 本发明公开一种在转基因品系特异性检测中扩增基因组品系特异序列方法。该方法将基因组DNA限制酶切，将人工合成的连接头与其相连，分别在连接头上和基因组已知区域设计引物，扩增基因组品系特异序列。本发明通过应用LA PCR技术，使以往扩增效率较低的长链未知区域的扩增变得简单，而且提高了保真性能。该方法还可制备成试剂盒，该试剂盒不必经过繁杂的文库构建及筛选、环化等，就能简单地得到基因组等上的长链目的DNA，并可减少变异点的导入，在转基因品系特异性检测中扩增品系特异性基因片段非常有效。
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公开(公告)号：CN1286303A
公开(公告)日：2001-03-07
申请号：CN00119616.2
申请日：2000-08-17
申请人： 上海市农业科学院生物技术研究中心
摘要： 本发明涉及遗传工程及突变,包括构建编码人龋齿致病菌－变异链球菌葡糖基转移酶(GTF)的酶活性区域(Cat)、底物接合区域(Glu)、Cat－Glu的基因及其与人乙型肝炎病毒核心蛋白的基因融合的三种融合基因,基因的酵母、植物表达载体,融合基因形成的颗粒结构同时具有人龋齿致病菌－变异链球菌葡萄糖基转移酶(GTF)的Gat、Glu、Cat－Glu抗原表位和乙肝核心抗原的双重抗原性和免疫原性。为人龋齿基因工程亚单位疫苗提供了一种新的方法。
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公开(公告)号：CN118480488A
公开(公告)日：2024-08-13
申请号：CN202410566134.3
申请日：2024-05-09
申请人： 上海市农业科学院 , 上海大度农业科技有限公司
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/32 , C12N15/29 , C12N15/62 , C12N15/70 , C07K14/325 , C07K14/415 , C07K14/81 , A01N63/20 , A01P7/04 , C12R1/19
摘要： 本发明提供一种同时表达Bt蛋白和CpTI蛋白的工程菌及其构建方法和应用，属于微生物技术领域。本发明所述工程菌的菌株名称为E.coli Rosett a(DE3)‑PGEX4T‑1‑Cry1AB/AC+CpTI，保藏编号为GDMCC No：64437。本发明通过构建重组表达载体，将Cry1AB/AC基因和CpTI基因整合到大肠杆菌中，构建了具有抗生素选择标记基因的双价杀虫大肠杆菌工程菌。该工程菌可以同时生产Bt杀虫蛋白(Cry1AB/AC)和豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowp ea Trypsin Inhibitor，CpTI)，对棉铃虫和小菜蛾具有较高的杀虫效果，具有广谱的杀虫效果。
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公开(公告)号：CN111233987B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202010227154.X
申请日：2020-03-27
申请人： 上海市农业科学院
IPC分类号： C07K14/325 , C07K1/13 , C07K1/14 , C12N15/32 , C12N15/70
摘要： 一种稳定同位素13C标记的Cry蛋白的制备方法，通过1)合成、克隆Cry基因；2)制备包含质粒表达载体的工程菌；3)原核表达；4)包涵体蛋白的变性、纯化及复性，在原核表达过程中，使用以葡萄糖为唯一碳源的培养基，使Cry蛋白中含有稳定同位素13C标记，获得稳定同位素13C标记的Cry蛋白，其具有较强的杀虫活性，纯度达到99％，适用于采用稳定同位素质谱技术分析Cry蛋白的环境行为和生态效益，为评价转Cry基因植物和释放的Cry蛋白的环境安全和生态学效应提供物质基础和技术支持。
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公开(公告)号：CN111233987A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010227154.X
申请日：2020-03-27
申请人： 上海市农业科学院
IPC分类号： C07K14/325 , C07K1/13 , C07K1/14 , C12N15/32 , C12N15/70
摘要： 一种稳定同位素13C标记的Cry蛋白的制备方法，通过1)合成、克隆Cry基因；2)制备包含质粒表达载体的工程菌；3)原核表达；4)包涵体蛋白的变性、纯化及复性，在原核表达过程中，使用以葡萄糖为唯一碳源的培养基，使Cry蛋白中含有稳定同位素13C标记，获得稳定同位素13C标记的Cry蛋白，其具有较强的杀虫活性，纯度达到99％，适用于采用稳定同位素质谱技术分析Cry蛋白的环境行为和生态效益，为评价转Cry基因植物和释放的Cry蛋白的环境安全和生态学效应提供物质基础和技术支持。
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公开(公告)号：CN106718179B
公开(公告)日：2020-05-05
申请号：CN201611037837.9
申请日：2016-11-23
申请人： 上海市农业科学院
摘要： 一种转基因青蒿的环境安全评价方法，该方法对转基因青蒿的农艺性状、抗逆性以及基因漂移进行测试，同时以野生型受体青蒿作对照，评估中设置的参数涵盖了转基因青蒿和其野生型受体差异性的各指标，为转基因青蒿的环境释放建立了模型，在说明两者实质等同性上具有重要示范意义，本发明从以上三个方面建立的评价体系操作简单，易于实现，直观性强，结果准确性高，该方法对转基因青蒿的环境安全评价提供了待测指标，为转基因青蒿品种的商业化风险评估提供了技术支撑。
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公开(公告)号：CN107151666A
公开(公告)日：2017-09-12
申请号：CN201610119545.3
申请日：2016-03-03
申请人： 上海市农业科学院
IPC分类号： C12N15/10
摘要： 一种水体中微生物DNA的提取方法，采用无菌微孔滤膜收集微生物，利用物理和化学方法破碎微生物细胞，其次采用醋酸钾、异硫氰酸胍、柠檬酸钠等试剂去除腐殖酸等杂质，将细胞裂解液进行多次离心纯化，最后用乙醇和醋酸钾抽提后得到纯化的微生物基因组DNA，所提取的微生物DNA具有较好的完整性，纯度高，产量高，其OD260/OD280比值在1.8～2.0之间，经琼脂糖凝胶电泳后染色，DNA条带清晰且单一，无拖尾，无杂带，获得的微生物DNA产量高、操作简单、成本低，提取过程无需再纯化，缩减了提取步骤，降底了提取成本，适用于各种水体微生物的多样性分析。
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