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公开(公告)号：CN108359717A
公开(公告)日：2018-08-03
申请号：CN201810447842.X
申请日：2018-05-11
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/6895 , C12Q1/689 , C12Q1/14 , C12N15/11
Abstract: 一种直扩RPA现场可视化检测方法，包括如下步骤：1)粗提待测样品基因组DNA；2)针对目的基因设计RPA特异性引物；3)将RPA特异性引物加入到RPA反应体系中进行RPA扩增反应，所述RPA反应体系中成分的终浓度为：外引物F 0.12-0.48μM，内引物R 0.12-0.48μM，dNTPs1.4-1.8mM，MgOAc 8.4-14mM，模板DNA 1～2μL；反应程序：32-42℃，5-10min；4)鉴定扩增结果：向扩增产物中加入SYBR Green I染料，直接在日光灯或者阳光下观察颜色变化：显色为绿色的样品为阳性；显色为橘色的样品为阴性。本发明可应用于来源于动物、植物、微生物的所有基因进行RPA检测，对RPA扩增产物实现了快速、简便、可视化鉴定。
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公开(公告)号：CN105255878B
公开(公告)日：2018-01-26
申请号：CN201510783471.9
申请日：2015-11-16
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12N15/11 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明公开了猪6号染色体上用于溯源的SNP分子标记及其应用，所述的SNP分子标记是通过NCBI数据库序列比对获得的，该SNP分子标记由TaiI限制性内切酶特异识别，共550bp，第362位碱基处有一个碱基替换，为362A或362G，其序列如SEQ ID NO.1所示。通过在包括10个猪品种或品系的试验群体中分析SNP分子标记在试验群体中等位基因的分布情况，发现本发明的SNP分子标记在不同的品种或品系中的等位基因频率接近，多态性丰富，品种或品系间等位基因频率分布差异小，并且杂合度都大于0.3，该SNP标记可用作猪肉产品DNA溯源。
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公开(公告)号：CN107236826A
公开(公告)日：2017-10-10
申请号：CN201710590207.2
申请日：2017-07-19
Applicant: 上海市农业科学院
CPC classification number: C12Q1/701
Abstract: 一种检测百合无症病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法，根据Genbank中查找到LSV的CP序列进行引物设计，该LAMP引物组包括外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，该LAMP引物组特异性强，与常见侵染百合的7种病毒无交叉，灵敏度高，可在模板纯度只有101拷贝数下进行扩增，建立的百合无症病毒的LAMP诊断方法，具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点，可用于环介导逆转录等温扩增，直接检验百合样品总RNA，减少实验假阴性或假阳性实验结果发生，在保证实验结果准确性的同时，更加经济节约，高效，非常易于临床推广。
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公开(公告)号：CN107151666A
公开(公告)日：2017-09-12
申请号：CN201610119545.3
申请日：2016-03-03
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12N15/10
Abstract: 一种水体中微生物DNA的提取方法，采用无菌微孔滤膜收集微生物，利用物理和化学方法破碎微生物细胞，其次采用醋酸钾、异硫氰酸胍、柠檬酸钠等试剂去除腐殖酸等杂质，将细胞裂解液进行多次离心纯化，最后用乙醇和醋酸钾抽提后得到纯化的微生物基因组DNA，所提取的微生物DNA具有较好的完整性，纯度高，产量高，其OD260/OD280比值在1.8～2.0之间，经琼脂糖凝胶电泳后染色，DNA条带清晰且单一，无拖尾，无杂带，获得的微生物DNA产量高、操作简单、成本低，提取过程无需再纯化，缩减了提取步骤，降底了提取成本，适用于各种水体微生物的多样性分析。
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公开(公告)号：CN102268078B
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201110208371.5
申请日：2009-04-01
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C07K14/08 , G01N33/576 , A61K39/29 , A61P31/14 , A61P1/16
Abstract: 本发明公开了一种猪戊型肝炎病毒抗原表位及其应用，所述猪戊型肝炎病毒抗原表位序列如SEQ ID No：5所示。通过计算机软件筛选和实验验证得到的猪戊肝病毒的抗原表位，一方面可以将其应用于快速特异猪戊肝诊断试剂盒，用于猪戊肝的快速诊断，特别是研制疫苗免疫抗体和自然隐性感染抗体的鉴别诊断技术用于猪戊肝流行的监控；另一方面也可以设计特异、安全和高效的猪戊肝疫苗用于猪戊肝的预防、控制猪戊肝的流行和阻断戊肝由猪向人传播。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101712953B
公开(公告)日：2012-06-20
申请号：CN200910200684.9
申请日：2009-12-24
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种用于评价动物肠道微生物群落多样性的DNA提取方法。在细胞裂解以前先对样品进行前处理，将胞外DNA及污染物进行去除，避免了纯化步骤存在污染物去除困难和DNA回收率低的问题。本发明提取过程不使用酚、氯仿，减少了对实验人员的身体健康伤害、所获DNA完整，分子片段大于10kb，产量高。所提取的肠道微生物DNA的OD260/OD230及OD260/OD280接近标准值，可直接应用于分子操作，以评价动物肠道微生物群落多样性。
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公开(公告)号：CN102399850A
公开(公告)日：2012-04-04
申请号：CN201010282911.X
申请日：2010-09-16
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/44
Abstract: 本发明涉及一种检测农药残留的速测卡及其制备方法和应用。所述速测卡包括：盖膜、第一塑料板、加样孔、酶片、塑料膜、第二塑料板和底物片。其中，所述盖膜粘贴于第一塑料板的表面上；所述第一塑料板的表面上设有至少两个加样孔，加样孔的背面粘贴有固定了家蝇乙酰胆碱酯酶的酶片，所述酶片位置与加样孔相对；所述第二塑料板上设有与所述酶片位置相对应的粘贴有固定了乙酰靛酚的底物片；所述塑料膜置于第一、第二塑料板中间。本发明的速测卡其采用的酶是经过分子进化的家蝇乙酰胆碱酯酶，具有比活性高、灵敏性好、稳定性强等优点，因而可快速简便地应用于农产品、食品、土壤尤其是蔬菜、水果中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测中。
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公开(公告)号：CN102286618A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110206191.3
申请日：2011-07-22
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/68 , C12Q1/04 , G01N27/447
Abstract: 本发明公开了一种应用于转基因作物根际土壤微生态安全性评价的PCR-DGGE技术，具体包括以下步骤：1)收集不同生育期的转基因作物、非转基因作物的根际土壤样品，进行基因组DNA提取；2)使用细菌、真菌、放线菌的特异性引物对对上述提取的各基因组DNA片段进行PCR扩增，扩增程序采用降落PCR；3)DGGE电泳分离得指纹印记图谱；4)对图谱进行数字化处理及UPGMA聚类分析。本发明可用于评价转基因作物对根际土壤微生物群落结构的影响，并由此评价转基因作物对根际土壤微生态系统的潜在安全风险。
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公开(公告)号：CN101712963B
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN200910200683.4
申请日：2009-12-24
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种突变的家蝇乙酰胆碱酯酶基因及其表达。所述基因是在现有的家蝇乙酰胆碱酯酶基因的氨基酸序列SEQ ID NO.1的第180、327和374三个位点发生氨基酸定点突变而得。所述基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，该基因能在酵母表达系统中快速高效地获得表达。本发明的突变的乙酰胆碱酯酶基因对低浓度的有机磷及氨基甲酸酯农药具有显著的敏感性，可以用于农产品中农药残留的检测，为研制农药生物学检测产品提供更为灵敏的蛋白酶材料，具有很大的应用价值。
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公开(公告)号：CN101812466A
公开(公告)日：2010-08-25
申请号：CN200910201071.7
申请日：2009-12-14
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12N15/31 , C07K14/195 , C12Q1/68 , C12Q1/04
Abstract: 本发明公开了一种编码单增李斯特溶血素O蛋白的核苷酸基因序列。通过突变增强单增李斯特溶血素O的抗原性，制得突变用质粒模版—单增李斯特菌溶血素O核苷酸序列；然后再对该质粒模版进行定点突变，即制得本发明的核苷酸基因序列。本发明的核苷酸基因序列不但可以提高单增李斯特菌溶血素O蛋白的抗原性，而且还能显著提高乐食品中单增李斯特菌的检测灵敏度，为开发食源性病原菌检测方法提供了有用的候选基因资源。
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