公开(公告)号：CN102251016A

公开(公告)日：2011-11-23

申请号：CN201110206246.0

申请日：2011-07-22

Applicant: 上海市农业科学院

Inventor： 唐雪明 ,  魏曼曼 ,  朱宏 ,  程凯 ,  王金斌 ,  赵凯

IPC: C12Q1/04

Abstract: 本发明公开了一种应用于转基因作物根际土壤微生态安全性评价的Biolog ECO微平板技术，包括以下步骤：1)收集不同生育期的转基因作物、非转基因亲本作物根际土壤样品；2)进行Biolog ECO实验；3)平均吸光度AWCD及多样性指数的计算；4)主成分PCA分析。本发明技术可用于评价转基因作物对根际土壤微生物群落功能的影响，并由此评价转基因作物对根际土壤微生态系统的潜在安全风险。

公开(公告)号：CN102094039A

公开(公告)日：2011-06-15

申请号：CN201010578641.7

申请日：2010-12-08

Applicant: 上海市农业科学院

Inventor： 唐雪明 ,  赵凯 ,  刘启文 ,  杨奇 ,  吴潇 ,  朱宏 ,  谭芙蓉 ,  王金斌 ,  陶世如 ,  蒋玲曦 ,  程凯 ,  魏曼曼

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02 ,  G01N33/68 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种转基因水稻Bt蛋白cry2a的原核表达及纯化方法，包括以下步骤：1)根据华中农业大学测序好的cry2a的基因，以及所要连接的载体PMD18-T的多克隆位点设计正、反向引物，进行PCR扩增和回收，并对PCR回收物进行DNA连接反应；2)大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备和转化；3)表达质粒的重组构建、重组菌的诱导表达；4)表达蛋白Ni-NTA亲和层析纯化。采用本发明方法得到的目的蛋白纯度达到90％以上，同时利用本发明制备的高纯度转基因水稻Bt蛋白cry2a可获得抗体，并可制作成胶体金免疫层析试纸条，以便在转基因植物检测中快速、准确的检测出Bt基因。

公开(公告)号：CN102094038A

公开(公告)日：2011-06-15

申请号：CN201010578268.5

申请日：2010-12-08

Applicant: 上海市农业科学院

Inventor： 唐雪明 ,  赵凯 ,  刘启文 ,  杨奇 ,  吴潇 ,  朱宏 ,  谭芙蓉 ,  王金斌 ,  陶世如 ,  蒋玲曦 ,  程凯 ,  魏曼曼

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02 ,  G01N33/68 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种转基因水稻Bt蛋白crylc的原核表达及纯化方法，包括以下步骤：1)根据华中农业大学测序好的crylc的基因，以及所要连接的载体PMD18-T的多克隆位点设计正、反向引物，进行PCR扩增和回收，并对PCR回收物进行DNA连接反应；2)大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备和转化；3)表达质粒的重组构建、重组菌的诱导表达；4)表达蛋白Ni-NTA亲和层析纯化。采用本发明方法得到的目的蛋白纯度达到90％以上，同时利用本发明制备的高纯度转基因水稻Bt蛋白crylc可获得抗体，并可制作成胶体金免疫层析试纸条，以便在转基因植物检测中快速、准确的检测出Bt基因。

公开(公告)号：CN102286618A

公开(公告)日：2011-12-21

申请号：CN201110206191.3

申请日：2011-07-22

Applicant: 上海市农业科学院

Inventor： 魏曼曼 ,  唐雪明 ,  朱宏 ,  程凯 ,  王金斌 ,  赵凯

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  G01N27/447

Abstract: 本发明公开了一种应用于转基因作物根际土壤微生态安全性评价的PCR-DGGE技术，具体包括以下步骤：1)收集不同生育期的转基因作物、非转基因作物的根际土壤样品，进行基因组DNA提取；2)使用细菌、真菌、放线菌的特异性引物对对上述提取的各基因组DNA片段进行PCR扩增，扩增程序采用降落PCR；3)DGGE电泳分离得指纹印记图谱；4)对图谱进行数字化处理及UPGMA聚类分析。本发明可用于评价转基因作物对根际土壤微生物群落结构的影响，并由此评价转基因作物对根际土壤微生态系统的潜在安全风险。