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公开(公告)号：CN119752746A
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202411734598.7
申请日：2024-11-29
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种高产特定表面活性素的枯草芽孢杆菌及其制备方法与应用，所述枯草芽孢杆菌由基因改造方法获得，能够高产C15组分表面活性素，最高可达72.5%；本发明还提供参与所述枯草芽孢杆菌生产表面活性素的酶突变体，包括羧基转移酶accAD、生物素羧化酶IdeHA、生物素羧化酶accBC和脂肪酸过加氧酶cypC；此外，本发明还提供所述枯草芽孢杆菌的制备方法与应用。本发明提供的高产特定表面活性素的枯草芽孢杆菌及其制备方法，有助于提高表面活性素产量，特别是C15组分表面活性素的工业化生产与商业化应用。
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公开(公告)号：CN118165960B
公开(公告)日：2025-03-25
申请号：CN202410340391.5
申请日：2024-03-25
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体及其基因、载体和制备方法。包括如下点突变：将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第221位谷氨酸突变为缬氨酸或亮氨酸，第117位赖氨酸突变为蛋氨酸或缬氨酸；和/或将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第159位缬氨酸突变为赖氨酸、天冬酰胺或精氨酸。本发明通过对来自Thermobifida fusca的内切β‑1,4‑葡聚糖酶原始酶的相邻β折叠结构中，空间位置相近的氨基酸进行定点突变，重组构建了多个热稳定性和pH耐受性较好的内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体。该特性有效提升了内切β‑1,4‑葡聚糖酶在实际工业生产环境中极端恶劣条件下的可用性。
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公开(公告)号：CN119193551A
公开(公告)日：2024-12-27
申请号：CN202411444882.0
申请日：2024-10-16
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种耐高浓度盐的内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体及其制备方法，所述突变体是将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第39位、第137位、第183位这三个位点中至少有一个氨基酸进行置换；第39位天冬氨酸Asp突变为苏氨酸Thr，第137位谷氨酸Glu突变为天冬酰胺Asn，第183位天冬氨酸Asp突变为丝氨酸Ser。通过对野生型内切β‑1,4‑葡聚糖酶进行三维建模确定突变位点，获得的突变体在含有大量盐分的环境下仍然能够保持较好的催化效率和稳定性，优化了内切β‑1,4‑葡聚糖酶在高浓度盐环境中的应用。
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公开(公告)号：CN118792291A
公开(公告)日：2024-10-18
申请号：CN202411003605.6
申请日：2024-07-25
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种高立体选择性的D‑苏氨酸醛缩酶突变体及其应用，所述突变体由野生型D‑苏氨酸醛缩酶定向进化得到，包括第146位天冬酰胺变为甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺中的任意一种，和/或第147位精氨酸突变为苯丙氨酸、酪氨酸中的任意一种，和/或第148位半胱氨酸突变为苯丙氨酸，和/或第177位酪氨酸突变为苯丙氨酸、组氨酸、色氨酸中的任意一种，和/或第312位丝氨酸突变为丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸中的任意一种。本发明提供的D‑苏氨酸醛缩酶突变体在合成D‑thero对甲砜基苯丝氨酸时具有较高的Cβ立体选择性和产率；应用所述突变体的反应条件温和、易于实现，在医药化工领域具有良好的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118165960A
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410340391.5
申请日：2024-03-25
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体及其基因、载体和制备方法。包括如下点突变：将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第221位谷氨酸突变为缬氨酸或亮氨酸，第117位赖氨酸突变为蛋氨酸或缬氨酸；和/或将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第159位缬氨酸突变为赖氨酸、天冬酰胺或精氨酸。本发明通过对来自Thermobifida fusca的内切β‑1,4‑葡聚糖酶原始酶的相邻β折叠结构中，空间位置相近的氨基酸进行定点突变，重组构建了多个热稳定性和pH耐受性较好的内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体。该特性有效提升了内切β‑1,4‑葡聚糖酶在实际工业生产环境中极端恶劣条件下的可用性。
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公开(公告)号：CN119193516A
公开(公告)日：2024-12-27
申请号：CN202411254901.3
申请日：2024-09-09
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了耐热葡萄糖脱氢酶突变体及其制备方法，具体包括5种葡萄糖脱氢酶突变体，分别为E96I、I183V、D255M、E96I/I183V和E96I/D255M。酶活性测定的结果显示，本发明提供的葡萄糖脱氢酶突变体具有良好的耐热性，在高温处理后，与原始酶相比仍具备较高酶活；本发明提供的葡萄糖脱氢酶突变体适用于高温条件下建立NADH和NADPH再生体系，为工业生物催化和制药应用提供了高效、低成本的新选择。
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公开(公告)号：CN119120428A
公开(公告)日：2024-12-13
申请号：CN202411298447.1
申请日：2024-09-18
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种耐酸性的α‑淀粉酶突变体及其制备方法，对贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)来源的α‑淀粉酶进行定点突变，所述突变为S242E、N569E、N605D中至少一种。本发明提供的α‑淀粉酶突变体具有良好的酸稳定性，在pH 1.9‑4.0时，本发明提供的α‑淀粉酶突变体催化淀粉水解的能力均有明显提升，增加了α‑淀粉酶在更宽的pH条件下的可用性，解决了现有α‑淀粉酶耐酸性较差而造成应用受限的问题。本发明对提高淀粉加工产业中的原料利用率和产品质量、降低生产成本具有显著效果，满足了能源、食品和饲料等领域中对于耐酸性α‑淀粉酶的需求，具有重要的社会和经济效益，应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN117904079B
公开(公告)日：2024-12-10
申请号：CN202410200479.7
申请日：2024-02-23
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑淀粉酶突变体及其基因、载体和制备方法。α‑淀粉酶突变体的点突变包括对原始酶氨基酸序列的第63位、第115位、第261位、第262位、第266位、第316位、第317位进行置换突变。该突变体的制备方法为：设计点突变引物，以原始酶基因为模板，采用点突变引物进行PCR反应得到突变基因和线性化质粒；将突变基因与线性化表达载体一步克隆连接后转入宿主菌进行发酵表达；收集重组菌后破碎细胞，离心取上清即得突变酶。基于该方法提供一种编码上述α‑淀粉酶突变体蛋白的基因并基于该基因序列构建了含有上述基因的克隆载体或表达载体。本发明中α‑淀粉酶突变体的热稳定性和pH耐受性较好，适用于工业生产。
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公开(公告)号：CN119020226A
公开(公告)日：2024-11-26
申请号：CN202411298421.7
申请日：2024-09-18
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种高产特定表面活性素的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）NJUXR‑YS001及其应用，所述枯草芽孢杆菌NJUXR‑YS001的保藏编号为CGMCC No.30289。本发明提供的枯草芽孢杆菌NJUXR‑YS001由诱变筛选得到，遗传稳定且能高产C15组分表面活性素，该菌株的表面活性素总产量达到1.85 g/L，其中C15组分表面活性素的产量1.32 g/L，占比达到71.3%；本发明提供的枯草芽孢杆菌NJUXR‑YS001使用常规的培养条件即可得到较高的C15组分表面活性素产量，适合于工业化生产，具有较高的应用价值和良好的开发前景。
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