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公开(公告)号：CN119060990A
公开(公告)日：2024-12-03
申请号：CN202411443601.X
申请日：2024-10-16
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种耐高温碱性α‑半乳糖苷酶突变体及其制备方法，所述突变体对来源于嗜维生素无氧芽孢杆菌的α‑半乳糖苷酶进行定点突变，将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第444位、第457位、第509位这三个位点中至少有一个氨基酸进行置换；第444位天冬酰胺Asn突变为苯丙氨酸Phe，第457位天冬氨酸Asp突变为甲硫氨酸Met，第509位精氨酸Arg突变为色氨酸Trp。本发明通过对嗜维生素无氧芽孢杆菌(Anoxybacillus vitaminiphilus WMF1)来源的α‑半乳糖苷酶进行定点突变，获得α‑半乳糖苷酶突变体具有良好的热稳定性和碱稳定性。
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公开(公告)号：CN117904079A
公开(公告)日：2024-04-19
申请号：CN202410200479.7
申请日：2024-02-23
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑淀粉酶突变体及其基因、载体和制备方法。α‑淀粉酶突变体的点突变包括对原始酶氨基酸序列的第63位、第115位、第261位、第262位、第266位、第316位、第317位进行置换突变。该突变体的制备方法为：设计点突变引物，以原始酶基因为模板，采用点突变引物进行PCR反应得到突变基因和线性化质粒；将突变基因与线性化表达载体一步克隆连接后转入宿主菌进行发酵表达；收集重组菌后破碎细胞，离心取上清即得突变酶。基于该方法提供一种编码上述α‑淀粉酶突变体蛋白的基因并基于该基因序列构建了含有上述基因的克隆载体或表达载体。本发明中α‑淀粉酶突变体的热稳定性和pH耐受性较好，适用于工业生产。
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公开(公告)号：CN118995650A
公开(公告)日：2024-11-22
申请号：CN202411254902.8
申请日：2024-09-09
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了高pH耐受能力的葡萄糖脱氢酶突变体及其应用，具体包括4种葡萄糖脱氢酶突变体，分别为G28V/A55N、G28V/A55M、V72L/L122M和L122V。酶活性测定的结果显示，本发明提供的4种葡萄糖脱氢酶突变体具有高pH耐受能力，突变体G28V/A55N、G28V/A55M和V72L/L122M在碱性溶液中的酶活优于原始酶，G28V/A55M和L122V在酸性溶液中的酶活性优于原始酶；本发明提供的葡萄糖脱氢酶突变体能够提高D‑葡萄糖酸和NADH的生产效率和产品质量，可应用于食品工业、制药行业等诸多领域，并且有助于新技术和新方法的开发。
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公开(公告)号：CN118910016A
公开(公告)日：2024-11-08
申请号：CN202411305408.X
申请日：2024-09-19
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明以地芽孢杆菌（Geobacillus sp. 70PC53）来源的内切葡聚糖酶作为原始酶，公开了3种pH耐受性提高的内切葡聚糖酶突变体，分别为V217L、A123S/I165V和A123G/I165L/V185S/V217C。本发明提供的内切葡聚糖酶突变体pH耐受性优于原始酶，在pH9.0的条件下，突变体相比原始酶的残留酶活可提高66%；本发明提供的内切葡聚糖酶突变体在pH3.0~11.0内的相对酶活均高于原始酶，能够在该条件下保持稳定高效的催化性能，工业应用前景较好。
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公开(公告)号：CN118910015A
公开(公告)日：2024-11-08
申请号：CN202411305403.7
申请日：2024-09-19
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明以地芽孢杆菌（Geobacillus sp.70PC53）来源的内切葡聚糖酶作为原始酶，公开了3种热稳定性提高的内切葡聚糖酶突变体，分别为V217L、N264Y和R170P/N264Y。本发明提供的内切葡聚糖酶突变体热稳定性优于原始酶，经95℃处理后，突变体相比原始酶的残留酶活可提高217%；本发明提供的内切葡聚糖酶突变体在65℃~95℃内的相对酶活均高于原始酶，能够在更高且更广的温度范围内保持良好的催化性能，工业应用前景较好。
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公开(公告)号：CN119913228A
公开(公告)日：2025-05-02
申请号：CN202510405137.3
申请日：2025-04-02
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明提供了一种高产单一组分鼠李糖脂的方法，属于生物技术领域，能够高产单一组分的性质稳定的鼠李糖脂，从而提高鼠李糖脂的应用效果。该方法对铜绿假单胞菌的野生型鼠李糖基转移酶rhlB或rhlA进行改造，改造后的鼠李糖基转移酶rhlB的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；改造后的鼠李糖基转移酶rhlA的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
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公开(公告)号：CN119662604A
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202411925108.1
申请日：2024-12-25
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了耐高温的β‑甘露聚糖酶突变体及其制备方法，野生型β‑甘露聚糖酶来自灰盖鬼伞菌(Coprinopsis cinerea)，使用定向进化的手段对其进行改造，得到耐高温的β‑甘露聚糖酶突变体，所述突变体的突变包括N381K、R123Y、M439L中的至少一种。本发明所述的β‑甘露聚糖酶突变体在碱性条件、更长加热时间下具有良好热稳定性，在pH 10的缓冲液中，90℃高温处理2 h，突变体的酶活性相比原始酶提高了107.0%，酶突变体催化β‑甘露聚糖酶水解的能力均有明显提升，具备广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN119662507A
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202411924439.3
申请日：2024-12-25
Applicant: 南京大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/75 , C12N15/90 , C12N15/52 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N9/00 , C12N9/02 , C12N9/10 , C12P21/02 , C12R1/125 , C12R1/07
Abstract: 本发明公开了高产表面活性素的枯草芽孢杆菌、相关酶突变体及其制备方法，所述枯草芽孢杆菌由基因改造方法获得，能够高产表面活性素，最高可达9.4 g/L；本发明还提供所述枯草芽孢杆菌中参与表面活性素合成的关键酶突变体，包括生物素羧化酶IdeHA突变体、生物素羧化酶accBC突变体、烯酰还原酶fabI突变体、丙二酰转移酶fabD突变体和二氢硫辛酰脱氢酶IPdU突变体。本发明公开的高产表面活性素的枯草芽孢杆菌及其制备方法，有助于实现表面活性素的工业化生产与商业化应用。
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公开(公告)号：CN119220511A
公开(公告)日：2024-12-31
申请号：CN202411446057.4
申请日：2024-10-16
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种还原型辅酶NADH氧化酶突变体及其应用，所述突变体是将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第156位、第158位、第294位这三个位点中至少有一个氨基酸进行置换；第156位甘氨酸Gly突变为丙氨酸Ala，第158位异亮氨酸Ile突变为组氨酸His，第294位异亮氨酸Ile突变为苯丙氨酸Phe。本发明通过NADH氧化酶的活性位点进行突变，最终获得的突变体提高了还原型辅酶NADH还原为氧化型辅酶NAD+的再生效率。
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公开(公告)号：CN119060988A
公开(公告)日：2024-12-03
申请号：CN202411383859.5
申请日：2024-09-30
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种耐盐的α‑淀粉酶突变体及其应用，所述突变体由野生型α‑淀粉酶定向进化得到，包括第47位的谷氨酸突变为苯丙氨酸，或第202位的谷氨酸突变为苯丙氨酸，或第248位的谷氨酸突变为苯丙氨酸，或第352位的天冬氨酸突变为缬氨酸，或第248位的谷氨酸突变为苯丙氨酸且第352位的天冬氨酸突变为缬氨酸。本发明提供的α‑淀粉酶突变体具有较高的耐盐性能，在高浓度的钠离子、镁离子、钙离子溶液中的酶活性高于原始酶；本发明还提供了所述突变体的制备方法与应用，提供了包含具有较高的耐盐性能的α‑淀粉酶突变体或其编码基因或相应载体或相应重组细胞，优化了α‑淀粉酶在高浓度盐环境中的应用。
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