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公开(公告)号：CN117904079B
公开(公告)日：2024-12-10
申请号：CN202410200479.7
申请日：2024-02-23
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑淀粉酶突变体及其基因、载体和制备方法。α‑淀粉酶突变体的点突变包括对原始酶氨基酸序列的第63位、第115位、第261位、第262位、第266位、第316位、第317位进行置换突变。该突变体的制备方法为：设计点突变引物，以原始酶基因为模板，采用点突变引物进行PCR反应得到突变基因和线性化质粒；将突变基因与线性化表达载体一步克隆连接后转入宿主菌进行发酵表达；收集重组菌后破碎细胞，离心取上清即得突变酶。基于该方法提供一种编码上述α‑淀粉酶突变体蛋白的基因并基于该基因序列构建了含有上述基因的克隆载体或表达载体。本发明中α‑淀粉酶突变体的热稳定性和pH耐受性较好，适用于工业生产。
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公开(公告)号：CN118931861A
公开(公告)日：2024-11-12
申请号：CN202411021686.2
申请日：2024-07-29
Applicant: 南京大学
IPC: C12N9/02 , C12N15/70 , C12N15/53 , C12N1/21 , C02F3/34 , C12R1/19 , C02F101/36 , C02F101/34
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450BM3突变体及其在区域选择性高效降解4‑氯苯酚中的应用，所述突变体是将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第51位、第82位、第330位至少有一个氨基酸进行置换；第51位酪氨酸Tyr突变为缬氨酸Val；第82位丙氨酸Ala突变为甲硫氨酸Met、第330位丙氨酸Ala突变为苯丙氨酸Phe。本发明使用定向进化的手段对细胞色素P450BM3进行改造，获得了具有高区域选择性(>99％)和4‑氯苯酚降解活性提高的P450BM3突变体。
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公开(公告)号：CN119162149A
公开(公告)日：2024-12-20
申请号：CN202411388871.5
申请日：2024-10-08
Applicant: 南京大学
IPC: C12N9/14 , C12N15/55 , C12N1/21 , C12N15/70 , C12P7/18 , C02F3/34 , C12N11/00 , C12R1/19 , C02F101/34 , C02F101/36
Abstract: 本发明公开了高效降解环氧氯丙烷的环氧化物水解酶突变体及其应用，野生型环氧化物水解酶来自放射性土壤杆菌（Agrobacterium radiobacter AD1），使用定向进化的手段对其进行改造，筛选出高效降解环氧氯丙烷的环氧化物水解酶突变体，所述突变包括D131N、Q134M、C248M中的至少一种。本发明提供的环氧化物水解酶突变体能够对环氧氯丙烷进行高效精准降解，并产生高附加值产物3‑氯‑1,2‑丙二醇，突变体D131N/Q134M/C248M的降解效率可达50%，是野生型的2倍；本发明提供的环氧化物水解酶突变体在水相常温下即可高效降解环氧氯丙烷，无需外加温控设备，具有高效率、低能耗、高选择性的特点，具备绿色低碳、经济便捷的产业应用优势，有利于污染物的进一步降解和资源化利用。
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公开(公告)号：CN118165960B
公开(公告)日：2025-03-25
申请号：CN202410340391.5
申请日：2024-03-25
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体及其基因、载体和制备方法。包括如下点突变：将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第221位谷氨酸突变为缬氨酸或亮氨酸，第117位赖氨酸突变为蛋氨酸或缬氨酸；和/或将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第159位缬氨酸突变为赖氨酸、天冬酰胺或精氨酸。本发明通过对来自Thermobifida fusca的内切β‑1,4‑葡聚糖酶原始酶的相邻β折叠结构中，空间位置相近的氨基酸进行定点突变，重组构建了多个热稳定性和pH耐受性较好的内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体。该特性有效提升了内切β‑1,4‑葡聚糖酶在实际工业生产环境中极端恶劣条件下的可用性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118931860A
公开(公告)日：2024-11-12
申请号：CN202411021681.X
申请日：2024-07-29
Applicant: 南京大学
IPC: C12N9/02 , C12N15/70 , C12N15/53 , C12N1/21 , C02F3/34 , C12R1/19 , C02F101/34 , C02F101/36
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450BM3突变体及其在降解2‑氯苯酚中的应用，所述突变体是将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第47位、第51位、第81位、第82位、第184位、第330位、第401位这七个位点中至少有一个氨基酸进行置换。通过对P450BM3活性中心关键氨基酸进行改造，获得了能够催化污染物2‑氯苯酚氧化的高降解效率和高选择性的P450BM3突变体，克服了现有技术对2‑氯苯酚降解效率低、选择性差的问题，在常温下即可高效降解，无需外加温控设备，具有绿色低碳的优点，在工程实践中具备更强的应用意义。
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公开(公告)号：CN118792291A
公开(公告)日：2024-10-18
申请号：CN202411003605.6
申请日：2024-07-25
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种高立体选择性的D‑苏氨酸醛缩酶突变体及其应用，所述突变体由野生型D‑苏氨酸醛缩酶定向进化得到，包括第146位天冬酰胺变为甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺中的任意一种，和/或第147位精氨酸突变为苯丙氨酸、酪氨酸中的任意一种，和/或第148位半胱氨酸突变为苯丙氨酸，和/或第177位酪氨酸突变为苯丙氨酸、组氨酸、色氨酸中的任意一种，和/或第312位丝氨酸突变为丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸中的任意一种。本发明提供的D‑苏氨酸醛缩酶突变体在合成D‑thero对甲砜基苯丝氨酸时具有较高的Cβ立体选择性和产率；应用所述突变体的反应条件温和、易于实现，在医药化工领域具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN118165960A
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410340391.5
申请日：2024-03-25
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体及其基因、载体和制备方法。包括如下点突变：将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第221位谷氨酸突变为缬氨酸或亮氨酸，第117位赖氨酸突变为蛋氨酸或缬氨酸；和/或将SEQ ID No.1所示氨基酸序列第159位缬氨酸突变为赖氨酸、天冬酰胺或精氨酸。本发明通过对来自Thermobifida fusca的内切β‑1,4‑葡聚糖酶原始酶的相邻β折叠结构中，空间位置相近的氨基酸进行定点突变，重组构建了多个热稳定性和pH耐受性较好的内切β‑1,4‑葡聚糖酶突变体。该特性有效提升了内切β‑1,4‑葡聚糖酶在实际工业生产环境中极端恶劣条件下的可用性。
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公开(公告)号：CN119120418A
公开(公告)日：2024-12-13
申请号：CN202411383850.4
申请日：2024-09-30
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了脱卤效率提高的卤醇脱卤酶突变体及其应用，野生型卤醇脱卤酶来自放射性土壤杆菌（Agrobacterium radiobacter AD1），使用定向进化的手段对其进行改造，筛选出脱卤效率提高的卤醇脱卤酶突变体，所述突变体的突变包括A83W、P84G、F86W中的至少一种。本发明提供的卤醇脱卤酶突变体能够对卤代醇类污染物2,3‑二氯‑1‑丙醇和3‑氯‑1,2‑丙二醇进行高效精准降解，降低其毒性，并产生高附加值产物，突变体A83W/P84G/F86W在1小时内对这两种物质的脱卤效率分别可达到42.2%和98.6%，是野生型的6倍和5.2倍；本发明提供的卤醇脱卤酶突变体在水相常温下即可实现高效脱卤，无需外加温控设备，具有高效率、低能耗、高选择性的特点，具备绿色低碳、经济便捷的产业应用优势，有利于污染物脱卤及资源化利用。
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公开(公告)号：CN117904079A
公开(公告)日：2024-04-19
申请号：CN202410200479.7
申请日：2024-02-23
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑淀粉酶突变体及其基因、载体和制备方法。α‑淀粉酶突变体的点突变包括对原始酶氨基酸序列的第63位、第115位、第261位、第262位、第266位、第316位、第317位进行置换突变。该突变体的制备方法为：设计点突变引物，以原始酶基因为模板，采用点突变引物进行PCR反应得到突变基因和线性化质粒；将突变基因与线性化表达载体一步克隆连接后转入宿主菌进行发酵表达；收集重组菌后破碎细胞，离心取上清即得突变酶。基于该方法提供一种编码上述α‑淀粉酶突变体蛋白的基因并基于该基因序列构建了含有上述基因的克隆载体或表达载体。本发明中α‑淀粉酶突变体的热稳定性和pH耐受性较好，适用于工业生产。
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