一种比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法

    公开(公告)号:CN110819684B

    公开(公告)日:2022-09-13

    申请号:CN201910834074.8

    申请日:2019-09-04

    Abstract: 本发明公开一种简单比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法。发明的方法就将等浓度的经复苏的山羊支原体山羊肺炎亚种接种于鸡胚上,再将接种后的鸡胚置于恒温箱内培养,定时检测鸡胚状态及死亡情况,统计各个菌株的鸡胚致死率,以此进行比较判定。本发明的方法具有操作简单、成本低、无需复杂动物饲养条件、实验动物易得、耗时短、重复性好等优点,大大减少动物试验工作量,避免了现有技术实验动物山羊存在价格较为昂贵、个体差异较大且饲养要求较高、试验操作复杂、试验周期长、工作量大等不足。

    筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法

    公开(公告)号:CN111323602A

    公开(公告)日:2020-06-23

    申请号:CN202010178953.2

    申请日:2020-03-15

    Abstract: 本发明公开了一种筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法,包括如下步骤:(1)将山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株接于MTB培养基中扩培后,菌液离心、灭菌、PBS超声重悬,分离得到抗原;(2)用所述抗原包被酶标板,37℃温箱1h后4℃过夜;加入封闭液,37℃封闭2h;加入200倍稀释的血清样品,37℃孵育1h;加入用5%脱脂奶粉稀释5000倍的兔抗羊二抗,37℃孵育1h;(3)用PBST洗板后加入TMB显色液,37℃孵育10min;加入终止液终止反应;酶标仪读取OD450nm值。本发明iELISA方法敏感性可达98%,操作简单,样本处理量大,不仅可用于Mccp和Mo两种病原血清学阴性羊的筛选,还可用于实验中Mccp抗体水平的监测。

    一种丝状支原体簇单克隆抗体及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN110256555A

    公开(公告)日:2019-09-20

    申请号:CN201910483526.2

    申请日:2019-06-04

    Abstract: 本发明公开了一种丝状支原体簇单克隆抗体及其制备方法和应用,所述丝状支原体单克隆抗体通过支原体培养和免疫原制备、动物免疫、细胞融合及阳性杂交瘤细胞筛选和克隆获得,所述支原体为山羊支原体山羊肺炎亚种M1601,细胞融合时髓瘤细胞和脾细胞的数量比为1/5~1/10,得到的丝状支原体簇单克隆抗体杂交瘤细胞株为5E5,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为C201972。所述的丝状支原体簇单克隆抗体可用于区分丝状支原体簇和细菌/病毒类病原体。本发明的杂交瘤细胞株能够分泌稳定的丝状支原体簇单克隆抗体特异性好,能够有效区分丝状支原体簇和其他常见反刍动物支原体。

    一种牛支原体的iiPCR检测方法及检测试剂盒

    公开(公告)号:CN109536625A

    公开(公告)日:2019-03-29

    申请号:CN201811514557.1

    申请日:2018-12-12

    CPC classification number: C12Q1/689 C12Q1/686 C12Q2527/101

    Abstract: 本发明公开了一种牛支原体的iiPCR检测方法及检测试剂盒。本发明通过以牛支原体的P80基因序列为模板,从P80基因克隆出包含R1序列的M.b序列,以该R1序列为目标设计探针M.b-specific-Probe;其中,所述M.b序列如SEQ ID NO:1所示。相应的,本发明的检测试剂盒,其成分除了商品化的Premix Ex Taq外,主要包括特别设计的牛支原体特异性的引物、探针及配套试剂:M.b-specific-Forward,M.b-specific-Reverse,M.b-specific-Probe,Nuclease-free water,阳性对照模板。本发明除了用于实验室常规检测牛支原体核酸外,特别适用于无实验室条件下(如基层兽医部门、养殖场等)的现场检测,具有高特异性和灵敏性,是一种快速、准确的牛支原体核酸检测试剂盒,具有良好的应用前景。

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