公开(公告)号：CN109536625A

公开(公告)日：2019-03-29

申请号：CN201811514557.1

申请日：2018-12-12

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  翟肖辉 ,  颜新敏 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  刘永生

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/35

CPC classification number: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2527/101

Abstract: 本发明公开了一种牛支原体的iiPCR检测方法及检测试剂盒。本发明通过以牛支原体的P80基因序列为模板，从P80基因克隆出包含R1序列的M.b序列，以该R1序列为目标设计探针M.b-specific-Probe；其中，所述M.b序列如SEQ ID NO：1所示。相应的，本发明的检测试剂盒，其成分除了商品化的Premix Ex Taq外，主要包括特别设计的牛支原体特异性的引物、探针及配套试剂：M.b-specific-Forward，M.b-specific-Reverse，M.b-specific-Probe，Nuclease-free water，阳性对照模板。本发明除了用于实验室常规检测牛支原体核酸外，特别适用于无实验室条件下(如基层兽医部门、养殖场等)的现场检测，具有高特异性和灵敏性，是一种快速、准确的牛支原体核酸检测试剂盒，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN109536625B

公开(公告)日：2023-01-03

申请号：CN201811514557.1

申请日：2018-12-12

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  翟肖辉 ,  颜新敏 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  刘永生

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了一种牛支原体的iiPCR检测方法及检测试剂盒。本发明通过以牛支原体的P80基因序列为模板，从P80基因克隆出包含R1序列的M.b序列，以该R1序列为目标设计探针M.b‑specific‑Probe；其中，所述M.b序列如SEQ ID NO：1所示。相应的，本发明的检测试剂盒，其成分除了商品化的Premix Ex Taq外，主要包括特别设计的牛支原体特异性的引物、探针及配套试剂：M.b‑specific‑Forward，M.b‑specific‑Reverse，M.b‑specific‑Probe，Nuclease‑free water，阳性对照模板。本发明除了用于实验室常规检测牛支原体核酸外，特别适用于无实验室条件下(如基层兽医部门、养殖场等)的现场检测，具有高特异性和灵敏性，是一种快速、准确的牛支原体核酸检测试剂盒，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN107099608A

公开(公告)日：2017-08-29

申请号：CN201710443863.X

申请日：2017-06-13

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 ,  金瑞鸿捷(厦门)生物科技有限公司 ,  北京华安瑞基生物科技有限公司

Inventor： 储岳峰 ,  赵萍 ,  朱建勋 ,  陈胜利 ,  郝华芳 ,  刘永生 ,  季文恒 ,  翟肖辉

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

CPC classification number: C12Q1/689 ,  C12Q2600/166

Abstract: 本发明公开了一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，它属于分子生物学检测领域。所述试剂盒包括：Premix Ex Taq引物Mccp‑specific‑Forward和Mccp‑specific‑Revers，探针Mccp‑specific‑Probe，阴性对照和阳性对照。本发明将检测结果同之前建立的山羊支原体山羊肺炎亚种实时荧光定量PCR检测结果进行比较，发现两种方法的符合率为100％。同时，本发明也对试剂盒的稳定性进行了检测，发现在‑20℃条件下，试剂盒至少可以保存一个月，这为山羊支原体山羊肺炎亚种的现场检测提供了极大的便利，省去了现场操作带来的交叉污染以及费时费力等问题。

公开(公告)号：CN107083441A

公开(公告)日：2017-08-22

申请号：CN201710444371.2

申请日：2017-06-13

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  朱建勋 ,  陈胜利 ,  赵萍 ,  郝华芳 ,  刘永生 ,  季文恒 ,  翟肖辉

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/35

CPC classification number: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2600/156 ,  C12Q2561/113 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2545/114 ,  C12Q2561/101

Abstract: 本发明公开了检测山羊支原体山羊肺炎亚种的荧光定量PCR试剂盒，它属于分子生物学检测领域。PCR试剂盒包含引物和探针,引物为：Mccp‑specific‑Forward：5′‑GTAGCAGCTATATTCTTAATCA‑3′，Mccp‑specific‑Reverse：5′‑GCTACAAATAATTCTTGCATAC‑3′，探针为：Mccp‑specific‑Probe：5′‑F‑AAGTAATACCAGCAGCAACAGCAAG‑Q‑3′，F为荧光报告基团，Q为荧光淬灭基团，探针5′端标记有荧光报告基团FAM，3′端标记有荧光淬灭基团TAMRA。试剂盒检测结果重复性较好，检测方法稳定，数据可靠。

公开(公告)号：CN109680080A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201811514580.0

申请日：2018-12-12

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  翟肖辉 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  颜新敏 ,  刘永生

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/35

CPC classification number: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q2521/507 ,  C12Q2531/119

Abstract: 本发明公开了一种牛支原体的nfo-RPA检测方法及检测试剂盒。本发明通过以牛支原体的P80基因序列为模板，从P80基因克隆出包含R1序列的M.b序列，以该R1序列为目标设计探针M.b-specific-Probe；其中，所述M.b序列如SEQ ID NO：1所示。相应的，本发明的检测试剂盒，其成分除了商品化的Freeze-dried reaction，280mM MgAc，Rehydration buffer，Test device和PCRD Extraction buffer外，主要包括特别设计的牛支原体特异性的引物、探针及配套试剂：M.b-specific-Forward，M.b-specific-Reverse，M.b-specific-Probe，Nuclease-free water，阳性对照模板。本发明除了用于实验室常规检测牛支原体核酸外，特别适用于无实验室条件下(如基层兽医部门、养殖场等)的现场检测，具有高特异性和灵敏性，是一种快速、准确的牛支原体核酸检测试剂盒，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN109680080B

公开(公告)日：2023-01-03

申请号：CN201811514580.0

申请日：2018-12-12

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  翟肖辉 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  颜新敏 ,  刘永生

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了一种牛支原体的nfo‑RPA检测方法及检测试剂盒。本发明通过以牛支原体的P80基因序列为模板，从P80基因克隆出包含R1序列的M.b序列，以该R1序列为目标设计探针M.b‑specific‑Probe；其中，所述M.b序列如SEQ ID NO：1所示。相应的，本发明的检测试剂盒，其成分除了商品化的Freeze‑dried reaction，280mM MgAc，Rehydration buffer，Test device和PCRD Extraction buffer外，主要包括特别设计的牛支原体特异性的引物、探针及配套试剂：M.b‑specific‑Forward，M.b‑specific‑Reverse，M.b‑specific‑Probe，Nuclease‑free water，阳性对照模板。本发明除了用于实验室常规检测牛支原体核酸外，特别适用于无实验室条件下(如基层兽医部门、养殖场等)的现场检测，具有高特异性和灵敏性，是一种快速、准确的牛支原体核酸检测试剂盒，具有良好的应用前景。