公开(公告)号：CN111323602A

公开(公告)日：2020-06-23

申请号：CN202010178953.2

申请日：2020-03-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  吴娅琴 ,  颜新敏 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  马丽娜 ,  刘永生

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，包括如下步骤：(1)将山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株接于MTB培养基中扩培后，菌液离心、灭菌、PBS超声重悬，分离得到抗原；(2)用所述抗原包被酶标板，37℃温箱1h后4℃过夜；加入封闭液，37℃封闭2h；加入200倍稀释的血清样品，37℃孵育1h；加入用5％脱脂奶粉稀释5000倍的兔抗羊二抗，37℃孵育1h；(3)用PBST洗板后加入TMB显色液，37℃孵育10min；加入终止液终止反应；酶标仪读取OD450nm值。本发明iELISA方法敏感性可达98％，操作简单，样本处理量大，不仅可用于Mccp和Mo两种病原血清学阴性羊的筛选，还可用于实验中Mccp抗体水平的监测。

公开(公告)号：CN110256555A

公开(公告)日：2019-09-20

申请号：CN201910483526.2

申请日：2019-06-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  吴娅琴 ,  颜新敏 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  刘永生 ,  赵天荣

IPC: C07K16/12 ,  C12N5/20 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种丝状支原体簇单克隆抗体及其制备方法和应用，所述丝状支原体单克隆抗体通过支原体培养和免疫原制备、动物免疫、细胞融合及阳性杂交瘤细胞筛选和克隆获得，所述支原体为山羊支原体山羊肺炎亚种M1601，细胞融合时髓瘤细胞和脾细胞的数量比为1/5～1/10，得到的丝状支原体簇单克隆抗体杂交瘤细胞株为5E5，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为C201972。所述的丝状支原体簇单克隆抗体可用于区分丝状支原体簇和细菌/病毒类病原体。本发明的杂交瘤细胞株能够分泌稳定的丝状支原体簇单克隆抗体特异性好，能够有效区分丝状支原体簇和其他常见反刍动物支原体。

公开(公告)号：CN111235289B

公开(公告)日：2022-04-22

申请号：CN202010178966.X

申请日：2020-03-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 颜新敏 ,  吴娅琴 ,  储岳峰 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  马丽娜 ,  刘永生

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了一种用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的特异性PCR引物，本发明首先通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因测序和对比，筛选到用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的靶序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示，然后设计了检测其的特异性PCR引物，可将Mccp与丝状支原体簇其他成员以及常见反刍动物支原体区分开，显示出良好的特异性，可作为新诊断靶标，以此为基础建立更具临床实用性的Mccp诊断技术。

公开(公告)号：CN111349637A

公开(公告)日：2020-06-30

申请号：CN202010178955.1

申请日：2020-03-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  吴娅琴 ,  颜新敏 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  马丽娜 ,  刘永生

IPC: C12N15/31 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白87.1及间接ELISA试剂盒，所述蛋白87.1具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列，所述山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白87.1制备的间接ELISA抗体检测试剂盒包括抗原蛋白87.1包被的酶标板、样品稀释液、阳性血清、阴性血清、洗涤液、封闭液、兔抗羊二抗、底物显色液、终止液。抗原蛋白87.1的包被量为625ng/孔，阳性血清和阴性血清的稀释度均为1/100。本发明提供的Mccp特异性蛋白87.1制备的间接ELISA试剂盒具有良好特异性，与Mccp阳性血清反应，且不与Mmc、Mcc阳性血清反应。

公开(公告)号：CN111349637B

公开(公告)日：2023-05-12

申请号：CN202010178955.1

申请日：2020-03-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  吴娅琴 ,  颜新敏 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  马丽娜 ,  刘永生

IPC: C12N15/31 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白87.1及间接ELISA试剂盒，所述蛋白87.1具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列，所述山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白87.1制备的间接ELISA抗体检测试剂盒包括抗原蛋白87.1包被的酶标板、样品稀释液、阳性血清、阴性血清、洗涤液、封闭液、兔抗羊二抗、底物显色液、终止液。抗原蛋白87.1的包被量为625ng/孔，阳性血清和阴性血清的稀释度均为1/100。本发明提供的Mccp特异性蛋白87.1制备的间接ELISA试剂盒具有良好特异性，与Mccp阳性血清反应，且不与Mmc、Mcc阳性血清反应。

公开(公告)号：CN111323602B

公开(公告)日：2021-09-14

申请号：CN202010178953.2

申请日：2020-03-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 储岳峰 ,  吴娅琴 ,  颜新敏 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  马丽娜 ,  刘永生

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，包括如下步骤：(1)将山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株接于MTB培养基中扩培后，菌液离心、灭菌、PBS超声重悬，分离得到抗原；(2)用所述抗原包被酶标板，37℃温箱1h后4℃过夜；加入封闭液，37℃封闭2h；加入200倍稀释的血清样品，37℃孵育1h；加入用5％脱脂奶粉稀释5000倍的兔抗羊二抗，37℃孵育1h；(3)用PBST洗板后加入TMB显色液，37℃孵育10min；加入终止液终止反应；酶标仪读取OD450nm值。本发明iELISA方法敏感性可达98％，操作简单，样本处理量大，不仅可用于Mccp和Mo两种病原血清学阴性羊的筛选，还可用于实验中Mccp抗体水平的监测。

公开(公告)号：CN111235289A

公开(公告)日：2020-06-05

申请号：CN202010178966.X

申请日：2020-03-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 颜新敏 ,  吴娅琴 ,  储岳峰 ,  郝华芳 ,  陈胜利 ,  马丽娜 ,  刘永生

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了一种用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的特异性PCR引物，本发明首先通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因测序和对比，筛选到用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的靶序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示，然后设计了检测其的特异性PCR引物，可将Mccp与丝状支原体簇其他成员以及常见反刍动物支原体区分开，显示出良好的特异性，可作为新诊断靶标，以此为基础建立更具临床实用性的Mccp诊断技术。