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公开(公告)号：CN105734032A
公开(公告)日：2016-07-06
申请号：CN201610176047.2
申请日：2016-03-25
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/63 , C12N15/85 , A01K67/027
CPC分类号： C12N9/22 , A01K67/0276 , A01K2227/102 , A01K2267/01 , C07K14/47 , C12N5/0656 , C12N15/8509 , C12N15/8772
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种山羊BLG基因定点敲除修饰系统及应用。所述定点敲除修饰系统为剪切山羊BLG基因靶序列的转录激活样效应因子核酸酶TALENs；本发明是利用该系统定点敲除山羊BLG基因和敲入人乳铁蛋白(hLF)基因，获得BLG?/hLF+转基因胎儿成纤维细胞，并应用该细胞作为供核细胞，通过体细胞核移植制备BLG?/hLF+基因打靶转基因山羊。为定点修饰的转基因哺乳动物制备建立了更为便捷、可靠和经济的技术体系。
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公开(公告)号：CN1688190A
公开(公告)日：2005-10-26
申请号：CN03823556.0
申请日：2003-07-14
申请人： GTC生物治疗学公司
CPC分类号： C12N15/8771 , A01K67/0273 , A01K2217/05 , A01K2227/10 , A01K2227/102 , A01K2267/01 , A01K2267/02 , C12N15/8509 , C12N15/877 , C12N15/8772
摘要： 本发明提供通过旁路繁殖生产在两条染色体上都携带有目的特异性转基因的纯合原代细胞。这些细胞系可以用于通过体细胞核转移加速生产纯合转基因动物。本发明从而用于生产和相当的杂合体比较能够在其乳汁中更高产量地生产目的生物药物的转基因有蹄类动物。通过将本发明中的筛选技术和体细胞核转移结合，可将本发明用于强烈需要缩短纯合化时间的大型动物上。
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公开(公告)号：CN105779496A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610156838.9
申请日：2016-03-18
申请人： 青岛农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/45 , C12N15/877
CPC分类号： C12N15/85 , C07K14/005 , C12N15/8772 , C12N2760/18422 , C12N2760/18434 , C12N2800/107
摘要： 本发明提供了一种利用山羊乳腺生物反应器制备犬瘟热融合蛋白基因重组疫苗的方法，具体步骤包括：(1)构建含有两个同源臂5?ARM和3?ARM的乳腺生物反应器表达载体；(2)TALENs载体的构建；(3)CDVF阳性细胞克隆的制备及筛选；和(4)CDVF阳性细胞克隆的核移植，靶克隆阳性个体和目的蛋白表达鉴定。通过上述犬瘟热融合蛋白基因乳腺生物反应器表达载体的构建，并利用TALENs将犬瘟热融合蛋白基因定点敲入至奶山羊成纤维细胞β?casein中，并通过体细胞核移植技术获得克隆胚，为犬瘟热重组疫苗的生产开辟的新的路径。
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公开(公告)号：CN1298841C
公开(公告)日：2007-02-07
申请号：CN03802084.X
申请日：2003-01-08
申请人： GTC生物治疗学公司
CPC分类号： C12N15/877 , A01K2217/05 , A01K2227/102 , A01K2267/01 , A01K2267/02 , C12N15/8772 , C12N2517/10
摘要： 本发明提供了数据证明不成功初次同时电融合和活化事件后，哺乳动物细胞核与去核的体内排出的卵母细胞的再次融合，提供了建立用于产生各种非人哺乳动物物种包括山羊、猪、啮齿动物、灵长目、兔和牛的活后代的活化和融合的能核转移的胚胎的另外的替代方法和改进。另外，多次电脉冲在动物核转移程序中产生有活力后代的同时融合活化方法学提供了替代的和更有效的活化方法。
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公开(公告)号：CN1615356A
公开(公告)日：2005-05-11
申请号：CN03802084.X
申请日：2003-01-08
申请人： GTC生物治疗学公司
CPC分类号： C12N15/877 , A01K2217/05 , A01K2227/102 , A01K2267/01 , A01K2267/02 , C12N15/8772 , C12N2517/10
摘要： 本发明提供了数据证明不成功初次同时电融合和活化事件后，哺乳动物细胞核与去核的体内排出的卵母细胞的再次融合，提供了建立用于产生各种非人哺乳动物物种包括山羊、猪、啮齿动物、灵长目、兔和牛的活后代的活化和融合的能核转移的胚胎的另外的替代方法和改进。另外，多次电脉冲在动物核转移程序中产生有活力后代的同时融合活化方法学提供了替代的和更有效的活化方法。
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公开(公告)号：CN108424931A
公开(公告)日：2018-08-21
申请号：CN201810266144.X
申请日：2018-03-29
申请人： 内蒙古大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/877 , C12N5/10 , A01K67/027
CPC分类号： C12N15/8509 , A01K67/0275 , A01K2217/072 , A01K2227/102 , A01K2267/02 , C07K14/485 , C12N5/0603 , C12N5/0656 , C12N9/22 , C12N15/8772 , C12N15/907 , C12N2510/00 , C12N2800/107 , C12N2810/10
摘要： 本发明利用CRISPER/Cas9系统介导完成山羊VEGF基因定点整合，其是依据山羊的FGF5基因序列，构建基于CRISPER/Cas9系统的Cas9-gRNA表达载体及VEGF打靶载体；然后将优化后的Cas9-gRNA表达载体及VEGF打靶载体共同转染至山羊胎儿成纤维细胞中，获得VEGF基因在FGF5位点定点整合的细胞株。本发明所构建的基于CRISPER/Cas9系统的打靶载体为山羊VEGF基因定点整合及FGF5基因靶向敲除提供了一种简单快捷安全的途径。该方法在细胞株筛选过程中没有涉及任何筛选标记基因，从而大大提高了转基因动物的安全性，对山羊的遗传育种以及基因功能的研究具有重要价值。
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公开(公告)号：CN107988257A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711322629.8
申请日：2017-12-12
申请人： 西北农林科技大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877 , C12N13/00
CPC分类号： C12N15/85 , C12N9/0004 , C12N13/00 , C12N15/8772 , C12N2830/006
摘要： 本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高。
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公开(公告)号：CN106636212A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201611005082.4
申请日：2016-11-15
申请人： 西北农林科技大学
IPC分类号： C12N15/877 , A01K67/027
CPC分类号： C12N15/8772 , A01K67/0276 , A01K2217/075 , A01K2227/102 , A01K2267/02 , C07K14/47 , C12N2800/80
摘要： 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统生产GDF9基因编辑山羊的方法。本发明首先获得针对山羊GDF9第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列；其次设计靶向DNA序列的sgRNA，构建针对GDF9第二外显子且含T7启动子的sgRNA体外转录载体；最后设计合成ssODN，利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA、sgRNA，通过受精卵注射体外转录载体获得的Cas9 mRNA、sgRNA和合成的ssODN，即可用于生产GDF9基因PV397I点突变的基因编辑山羊。
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公开(公告)号：CN106755112A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611224097.X
申请日：2016-12-27
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12N15/877 , A01K67/027
CPC分类号： C12N15/877 , A01K67/0273 , A01K2227/10 , A01K2227/102 , A01K2227/103 , C12N15/8772 , C12N15/8773
摘要： 本发明涉及一种利用体细胞克隆技术培育地方优良家畜品种的方法。利用体细胞克隆技术培育家畜优良品种，通过从家畜群体中筛选出经济性状优良的个体，建立成纤维细胞系，利用体细胞核移植技术对上述筛选出的个体进行克隆，待克隆出生的个体达到适配年龄后，进行组合杂交，再对每一杂交组合的F1代个体的经济性状进行鉴定，对达不到选育标准的F1代个体父母，查明是父代还是母代遗传引起的性状，然后对相应的父母个体进行淘汰，对留下的后代个体中可以稳定遗传的父母再进行组群，选育出优良家畜品种。通过对本发明的实施，能批量地获得具有极其优良经济性状的家畜个体，实现家畜特有品种资源的可持续开发利用，提高家畜的育种效率和选育的成功率。
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公开(公告)号：CN106119203A
公开(公告)日：2016-11-16
申请号：CN201510978161.2
申请日：2015-12-23
申请人： 内蒙古大学
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/85 , C12N15/877 , A01K67/027
CPC分类号： C07K14/4732 , A01K67/0273 , A01K67/0275 , A01K2217/05 , A01K2227/102 , A01K2267/01 , C07K14/47 , C12N15/8509 , C12N15/8772 , C12N2800/107 , C12N2800/80
摘要： 本发明公开了TALENs介导的奶山羊成纤维细胞基因敲除和基因定点插入的方法，其是根据奶山羊CSN2基因序列，获得针对第二外显子的TALENs表达载体，并根据TALENs作用位点设计含有外源基因的且可以整合至宿主基因组中的打靶载体，然后将上述TALENs表达载体和打靶载体共同转入奶山羊成纤维细胞中，获得CSN2基因敲除且定点整合外源基因的细胞。TALENs技术具有实验设计简单准确、实验周期短、成本低、成功率高、脱靶情况少等优点。利用本方法可以快速获得双等位基因整合的细胞克隆，细胞不经过药物筛选，提高了所获得体细胞的核移植和胚胎发育质量，不含有抗性基因，大大简化了生物安全评价。
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