公开(公告)号：CN119548286A

公开(公告)日：2025-03-04

申请号：CN202411750997.2

申请日：2024-12-02

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 苏建民 ,  柳浩文 ,  刘锦旺 ,  张迎冰 ,  刘军 ,  张涌

IPC: A61D19/02

Abstract: 本发明属于畜牧人工授精技术领域，涉及一种家畜用子宫内连续输精装置，包括装置主体，其内部贯穿设置有一注射通道，注射通道的一端设置注射头，装置主体的一侧设置有装填孔，装填孔与注射通道连通，装填孔内可拆卸设置有密封盖，还包括保护机构和复位机构。通过第一保护外壳配合第二保护外壳，利用复位机构使第一保护外壳和第二保护外壳以向内转动，使第一保护外壳和第二保护外壳相对扣合形成容纳注射头的腔室，从而对注射头进行保护，在闲置和携带装置时对注射头进行防护，通过设置装填孔，在不同母畜个体之间注射时不需要重复进行精液样本补充，提高连续授精的灵活性，同时进一步降低母畜输精时的感染风险，也降低了操作难度。

公开(公告)号：CN118703623A

公开(公告)日：2024-09-27

申请号：CN202411031282.1

申请日：2024-07-30

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 高元鹏 ,  张新艳 ,  齐雪峰 ,  张涌

IPC: C12Q1/6883 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11 ,  C12R1/32

Abstract: 本发明公开了一种与牛结核病有关的SPN结构变异位点的鉴定方法，属于基因工程技术领域，提供的鉴定方法包括以下步骤：待测海南牛基因组DNA提取；设计PCR扩增引物对，扩增；扩增产物凝胶电泳检测核酸鉴定；PCR扩增引物对由2‑F和2‑R组成或由3‑F和3‑R组成，2‑F的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，2‑R的核苷酸序列为SEQ ID NO.2，3‑F的核苷酸序列为SEQ ID NO.4，3‑R的核苷酸序列为SEQ ID NO.5。本发明提供了针对牛SPN结构变异位点的鉴定方法，利用特异引物对，扩增SPN基因的结构变异位点，确认SPN存在一段特殊的重复序列插入，条带清晰、准确性高、特异性良好。

公开(公告)号：CN118109510A

公开(公告)日：2024-05-31

申请号：CN202410119987.2

申请日：2024-01-29

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌职业技术学院

Inventor： 刘军 ,  米晓钰 ,  张涌 ,  罗艳 ,  祝振亮 ,  赵江林 ,  薛姣雄 ,  高丹丹

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明涉及基因表达与调控技术领域，公开了一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子及表达载体，首先利用NCBI检索奶山羊四种酪蛋白基因序列，检测奶山羊四种酪蛋白转录结合因子的潜在信号。挖掘及鉴定出奶山羊泌乳期特异性增强酪蛋白基因表达的关键基序，为解决奶山羊乳腺生物反应器外源基因表达低的难题提供天然调控元件，通过筛选出奶山羊泌乳期能特异性提高内源性酪蛋白基因表达的5个超级增强子序列，并在细胞水平上验证了序列的有效性和安全性，是来自于奶山羊的天然基序及调控序列，解决了现有奶山羊乳腺生物反应器缺乏专属于奶山羊泌乳期乳腺显著增强外源基因表达上调的内源性关键基序及调控序列致使外源基因表达水平低下的问题。

公开(公告)号：CN108103011B

公开(公告)日：2019-02-01

申请号：CN201810134698.4

申请日：2018-02-09

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张景程 ,  张涌 ,  马晓楠 ,  张敏 ,  王勇胜

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明提供一种牛卵母细胞体外成熟培养液及培养方法，成熟培养液包括10％的胎牛血清和1％的ITS‑G，并含有0.075IU/mL的HMG、1μg/mL的17β‑雌二醇、10ng/mL的EGF、2.2mg/mL的bFGF和50ng/mL的CXCL12。利用上述培养液进行牛卵母细胞体外成熟培养，可以提高牛卵母细胞体外培养的成熟质量、体外受精胚胎发育率和体细胞核移植胚胎发育率和囊胚质量。

公开(公告)号：CN109112159A

公开(公告)日：2019-01-01

申请号：CN201811039181.3

申请日：2018-09-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  康健 ,  权富生 ,  谢晓刚 ,  葛陆星 ,  董翔宸 ,  王丰瑜 ,  孙洪政 ,  韩成全

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变打靶载体及重组细胞，本发明利用电穿孔的方法将靶向MSTN基因的Cas9真核表达载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现对鲁西黄牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶，获得MSTN位点定点敲入FABP4基因和MSTN基因点突变的牛胎儿成纤维细胞。通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为供核细胞移入去核的牛卵母细胞中，可获得转基因克隆胚胎，为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供坚实基础。

公开(公告)号：CN106086080A

公开(公告)日：2016-11-09

申请号：CN201610537461.1

申请日：2016-07-08

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张景程 ,  张涌 ,  屈鹏翔 ,  王勇胜

IPC: C12N15/877 ,  C12N5/073

CPC classification number: C12N15/8771 ,  C12N5/0604

Abstract: 本发明公开了一种利用微小核糖核酸提高牛克隆效率的方法，在体细胞核移植的电融合液中加入bta‑miR‑125b mimic，可以有效地导入到胚胎中，在避免产生转染的二次损伤的同时，还能有效地减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量。

公开(公告)号：CN104293833A

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201410528091.6

申请日：2014-10-09

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  吴海波 ,  王勇胜 ,  张艳 ,  吕佳星

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体及重组细胞，对牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶获得的M-S位点定点敲入Sp110基因的牛胎儿成纤维细胞。利用打靶载体中的MSR1启动子，使得定点敲入的Sp110在且仅在牛的外周血巨噬细胞中正常转录和表达。本发明利用电穿孔的方法将打靶载体和TALEN位点特异性核酸切割酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，通过PCR和Southern Blotting筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚胎。将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫中，最终生产成活的转基因克隆牛。

公开(公告)号：CN102943092B

公开(公告)日：2014-12-10

申请号：CN201210472708.8

申请日：2012-11-20

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  胡广东 ,  王静 ,  余源 ,  高元鹏

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/64

Abstract: 本发明公开了一种通用型PiggyBac转座子转基因载体及其制备方法，包括供体载体和辅助载体；所述的供体载体包括PiggyBac转座子5’重复末端序列5’TR和3’重复末端序列3’TR，在5’TR和3’TR之间设有两个绝缘子，在绝缘子序列之间设有多克隆位点；所述的辅助载体包括PiggyBac转座酶编码基因Pbase，在Pbase的上游设有启动子，在其下游设有PloyA。将外源基因克隆至供体载体的多克隆位点中，然后再与辅助载体混合转染细胞，稳定筛选细胞单克隆，通过PB转座子元件将外源基因特异性整合到基因组中的TTAA位点。

公开(公告)号：CN102747102B

公开(公告)日：2014-02-19

申请号：CN201210269209.9

申请日：2012-07-31

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  罗艳 ,  刘军 ,  王勇胜 ,  权富生 ,  郭泽坤 ,  余源

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12P21/02 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种HSA乳腺特异性表达载体及其构建的重组细胞，该载体包括位于启动子下游的目的基因HSA，在HSA基因的5'端连接BCP5序列，在其3'端连接有BGHpolyA序列；在启动子的上游还设有phiC31整合酶特异性识别位点。通过在HSA基因5'端插入牛β-酪蛋白基因的和3'端插入牛生长激素polyA，牛β-酪蛋白基因的5'调控区和BGHpolyA能够指导目的基因在牛的乳腺组织中特异的高效表达。以包含目的基因HSA的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转HSA基因的奶牛。

公开(公告)号：CN102329819B

公开(公告)日：2012-12-19

申请号：CN201110300097.4

申请日：2011-09-27

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 常博皞 ,  张涌 ,  彭辉 ,  苏建民

IPC: C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种siRNA转染胚胎的电穿孔方法，包括以下步骤：1)对胚胎透明带进行弱化处理；2)配制含siRNA的电穿孔溶液；3)将胚胎移入配制好的含siRNA的电穿孔溶液，室温静置，然后再将胚胎连同电穿孔溶液移入电转槽中进行电穿孔。本发明包括对胚胎的透明带的弱化处理和siRNA的络合处理，然后通过将胚胎置于脉冲电场作用下，导致其通透性和膜电导瞬时增大，使在正常生理情况下细胞膜难以通透的siRNA进入细胞。统计学观察分析表明，本发明存活胚胎稳定阳性转染率超过95％，采集的总胚胎实际有效利用率超过70％，是一种安全、简便、高效的siRNA转染哺乳类动物胚胎的技术。