公开(公告)号：CN109112159A

公开(公告)日：2019-01-01

申请号：CN201811039181.3

申请日：2018-09-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  康健 ,  权富生 ,  谢晓刚 ,  葛陆星 ,  董翔宸 ,  王丰瑜 ,  孙洪政 ,  韩成全

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变打靶载体及重组细胞，本发明利用电穿孔的方法将靶向MSTN基因的Cas9真核表达载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现对鲁西黄牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶，获得MSTN位点定点敲入FABP4基因和MSTN基因点突变的牛胎儿成纤维细胞。通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为供核细胞移入去核的牛卵母细胞中，可获得转基因克隆胚胎，为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供坚实基础。

公开(公告)号：CN110283847A

公开(公告)日：2019-09-27

申请号：CN201910482661.5

申请日：2019-06-04

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 权富生 ,  董翔宸 ,  张涌 ,  葛陆星 ,  康健 ,  刘旭 ,  谢晓刚

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种同时定点整合FAD3和FABP4基因的载体及重组细胞，利用电穿孔的方法将靶向Rosa26基因的Cas9切割载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现将FAD3和FABP4基因同时定点插入到鲁西黄牛胎儿成纤维细胞基因组中；通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶阳性克隆细胞；以本发明定点插入外源基因的阳性细胞为供核细胞移入去核的牛成熟卵母细胞中，获得转基因克隆胚胎，进一步将克隆胚胎移植到受体牛体内，可获得所期望的转基因牛。本发明为快速、高效研制优质转基因肉牛育种新材料提供了供核细胞和技术方法。

公开(公告)号：CN109679998A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201910023959.X

申请日：2019-01-10

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 权富生 ,  葛陆星 ,  张涌 ,  杨佳姝 ,  康健 ,  董翔宸 ,  谢晓刚 ,  王勇胜

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/10 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种通过miRNA靶向定点突变MSTN基因并同时定点整合PPARγ基因的载体及重组细胞，载体包括Cas9切割表达载体和打靶载体。本发明将Cas9切割表达载体和打靶载体共同转染宿主细胞，构建重组细胞株，可以作为生产转基因克隆胚胎的核移植供体细胞，抑制MSTN的功能发挥，同时实现PPARγ在骨骼肌细胞中特异性表达，进而为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供支撑。

公开(公告)号：CN109679998B

公开(公告)日：2020-04-28

申请号：CN201910023959.X

申请日：2019-01-10

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 权富生 ,  葛陆星 ,  张涌 ,  杨佳姝 ,  康健 ,  董翔宸 ,  谢晓刚 ,  王勇胜

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/10 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种通过miRNA靶向定点突变MSTN基因并同时定点整合PPARγ基因的载体及重组细胞，载体包括Cas9切割表达载体和打靶载体。本发明将Cas9切割表达载体和打靶载体共同转染宿主细胞，构建重组细胞株，可以作为生产转基因克隆胚胎的核移植供体细胞，抑制MSTN的功能发挥，同时实现PPARγ在骨骼肌细胞中特异性表达，进而为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供支撑。