公开(公告)号：CN109112159A

公开(公告)日：2019-01-01

申请号：CN201811039181.3

申请日：2018-09-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  康健 ,  权富生 ,  谢晓刚 ,  葛陆星 ,  董翔宸 ,  王丰瑜 ,  孙洪政 ,  韩成全

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变打靶载体及重组细胞，本发明利用电穿孔的方法将靶向MSTN基因的Cas9真核表达载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现对鲁西黄牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶，获得MSTN位点定点敲入FABP4基因和MSTN基因点突变的牛胎儿成纤维细胞。通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为供核细胞移入去核的牛卵母细胞中，可获得转基因克隆胚胎，为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供坚实基础。

公开(公告)号：CN105524940B

公开(公告)日：2019-04-05

申请号：CN201511025413.6

申请日：2015-12-31

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  刘鑫 ,  苏建民 ,  高明清 ,  王勇胜 ,  孙洪政

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法。本发明提供的载体包括阻遏物表达载体和含有阻遏操纵子的表达载体，在转染时将两者共转染到供体细胞中；所述的含有阻遏操纵子的表达载体中插入有牛KDM4B或牛KDM4C基因。将阳性转染的细胞作为供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚培养至36h时，诱导表达牛KDM4B和KDM4C。本发明可以有效减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高。

公开(公告)号：CN110042123B

公开(公告)日：2023-01-17

申请号：CN201910307633.X

申请日：2019-04-17

Applicant: 西北农林科技大学 ,  西宁市畜牧兽医站

Inventor： 苏建民 ,  张涌 ,  张成图 ,  孙洪政 ,  陈永忠 ,  孟茹 ,  安全利 ,  程宇尧 ,  王勇胜 ,  权富生

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N5/073

Abstract: 本发明公开了一种提高牛体细胞克隆效率的方法，通过诱导表达zfp57基因使牛克隆胚胎发育过程中的印迹基因甲基化恢复正常水平，从而提高牛体细胞克隆效率。本发明提供的一种提高牛体细胞克隆效率的方法，利用zfp57纠正牛克隆胚胎上异常的印迹基因低甲基化，使其甲基化水平到达和体外受精胚胎接近的水平，从而提高牛克隆胚胎的胚胎质量，促进牛克隆胚胎的发育；为阐明体细胞克隆胚胎重编程过程中甲基化印迹异常的机理以及体细胞克隆效率低下的原因提供理论依据。

公开(公告)号：CN110042123A

公开(公告)日：2019-07-23

申请号：CN201910307633.X

申请日：2019-04-17

Applicant: 西北农林科技大学 ,  西宁市畜牧兽医站

Inventor： 苏建民 ,  张涌 ,  张成图 ,  孙洪政 ,  陈永忠 ,  孟茹 ,  安全利 ,  程宇尧 ,  王勇胜 ,  权富生

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N5/073

Abstract: 本发明公开了一种提高牛体细胞克隆效率的方法，通过诱导表达zfp57基因使牛克隆胚胎发育过程中的印迹基因甲基化恢复正常水平，从而提高牛体细胞克隆效率。本发明提供的一种提高牛体细胞克隆效率的方法，利用zfp57纠正牛克隆胚胎上异常的印迹基因低甲基化，使其甲基化水平到达和体外受精胚胎接近的水平，从而提高牛克隆胚胎的胚胎质量，促进牛克隆胚胎的发育；为阐明体细胞克隆胚胎重编程过程中甲基化印迹异常的机理以及体细胞克隆效率低下的原因提供理论依据。

公开(公告)号：CN105524940A

公开(公告)日：2016-04-27

申请号：CN201511025413.6

申请日：2015-12-31

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  刘鑫 ,  苏建民 ,  高明清 ,  王勇胜 ,  孙洪政

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

CPC classification number: C12N15/8509 ,  C12N15/8771

Abstract: 本发明公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法。本发明提供的载体包括阻遏物表达载体和含有阻遏操纵子的表达载体，在转染时将两者共转染到供体细胞中；所述的含有阻遏操纵子的表达载体中插入有牛KDM4B或牛KDM4C基因。将阳性转染的细胞作为供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚培养至36h时，诱导表达牛KDM4B和KDM4C。本发明可以有效减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高。