公开(公告)号：CN107988257B

公开(公告)日：2019-02-01

申请号：CN201711322629.8

申请日：2017-12-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  刘军 ,  韩成全 ,  苏建民 ,  毛廷超 ,  王勇胜 ,  康健

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  C12N13/00

Abstract: 本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高。

公开(公告)号：CN107988257A

公开(公告)日：2018-05-04

申请号：CN201711322629.8

申请日：2017-12-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  刘军 ,  韩成全 ,  苏建民 ,  毛廷超 ,  王勇胜 ,  康健

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  C12N13/00

CPC classification number: C12N15/85 ,  C12N9/0004 ,  C12N13/00 ,  C12N15/8772 ,  C12N2830/006

Abstract: 本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高。

公开(公告)号：CN109112159A

公开(公告)日：2019-01-01

申请号：CN201811039181.3

申请日：2018-09-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  康健 ,  权富生 ,  谢晓刚 ,  葛陆星 ,  董翔宸 ,  王丰瑜 ,  孙洪政 ,  韩成全

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变打靶载体及重组细胞，本发明利用电穿孔的方法将靶向MSTN基因的Cas9真核表达载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现对鲁西黄牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶，获得MSTN位点定点敲入FABP4基因和MSTN基因点突变的牛胎儿成纤维细胞。通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为供核细胞移入去核的牛卵母细胞中，可获得转基因克隆胚胎，为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供坚实基础。