公开(公告)号：CN109112159A

公开(公告)日：2019-01-01

申请号：CN201811039181.3

申请日：2018-09-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  康健 ,  权富生 ,  谢晓刚 ,  葛陆星 ,  董翔宸 ,  王丰瑜 ,  孙洪政 ,  韩成全

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变打靶载体及重组细胞，本发明利用电穿孔的方法将靶向MSTN基因的Cas9真核表达载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现对鲁西黄牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶，获得MSTN位点定点敲入FABP4基因和MSTN基因点突变的牛胎儿成纤维细胞。通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为供核细胞移入去核的牛卵母细胞中，可获得转基因克隆胚胎，为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供坚实基础。