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公开(公告)号：CN110042123A
公开(公告)日：2019-07-23
申请号：CN201910307633.X
申请日：2019-04-17
Abstract: 本发明公开了一种提高牛体细胞克隆效率的方法，通过诱导表达zfp57基因使牛克隆胚胎发育过程中的印迹基因甲基化恢复正常水平，从而提高牛体细胞克隆效率。本发明提供的一种提高牛体细胞克隆效率的方法，利用zfp57纠正牛克隆胚胎上异常的印迹基因低甲基化，使其甲基化水平到达和体外受精胚胎接近的水平，从而提高牛克隆胚胎的胚胎质量，促进牛克隆胚胎的发育；为阐明体细胞克隆胚胎重编程过程中甲基化印迹异常的机理以及体细胞克隆效率低下的原因提供理论依据。
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公开(公告)号：CN109679998A
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201910023959.X
申请日：2019-01-10
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种通过miRNA靶向定点突变MSTN基因并同时定点整合PPARγ基因的载体及重组细胞，载体包括Cas9切割表达载体和打靶载体。本发明将Cas9切割表达载体和打靶载体共同转染宿主细胞，构建重组细胞株，可以作为生产转基因克隆胚胎的核移植供体细胞，抑制MSTN的功能发挥，同时实现PPARγ在骨骼肌细胞中特异性表达，进而为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供支撑。
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公开(公告)号：CN107988257B
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201711322629.8
申请日：2017-12-12
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877 , C12N13/00
Abstract: 本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108611371A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810457000.2
申请日：2018-05-14
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/90 , C12N15/873 , C12N15/62 , A01K67/027 , C07K19/00 , A61K39/12 , A61P31/14
CPC classification number: C12N15/85 , A01K67/0278 , A01K2217/072 , A01K2227/102 , A01K2267/01 , A61K39/12 , A61K2039/552 , A61P31/14 , C07K14/005 , C07K2319/00 , C07K2319/21 , C12N9/22 , C12N15/62 , C12N15/65 , C12N15/873 , C12N15/907 , C12N2770/10022 , C12N2770/10034 , C12N2800/107 , C12N2800/30 , C12N2830/50
Abstract: 本发明公开了乳汁中表达GP5-M融合蛋白的羊乳腺生物反应器的制备方法，制备GP5-M融合表达的基因打靶载体，敲入奶山羊β-乳球蛋白第一外显子上，筛选中靶细胞，利用体细胞核移植技术制备转基因奶山羊，通过乳腺生物反应器生产含有GP5-M融合蛋白的乳汁，从乳汁中分离纯化GP5-M融合蛋白，添加佐剂制备基因工程亚单位疫苗，达到防控PRRS的目的。
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公开(公告)号：CN105524940A
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201511025413.6
申请日：2015-12-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
CPC classification number: C12N15/8509 , C12N15/8771
Abstract: 本发明公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法。本发明提供的载体包括阻遏物表达载体和含有阻遏操纵子的表达载体，在转染时将两者共转染到供体细胞中；所述的含有阻遏操纵子的表达载体中插入有牛KDM4B或牛KDM4C基因。将阳性转染的细胞作为供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚培养至36h时，诱导表达牛KDM4B和KDM4C。本发明可以有效减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高。
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公开(公告)号：CN103305551B
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201310232306.5
申请日：2013-06-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/873 , C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种基于囊胚上基因表达水平筛选供体细胞系的方法，将来源不同个体的供体细胞系进行核移植后，在囊胚期检测TCF7、DGCR8、SENP7、DNMT3B、Vimentin、IFI6、EFNA2、F5、IRAK1、PRICKLE1、TNFRSF1A、ARG2、NEK6、OCT4、NANOG、SOX2、CDX2、XIST和IGF2R的表达水平，选择在克隆囊胚上这些基因的表达水平全部与正常发育的体外受精囊胚上的表达水平差异不显著的供体细胞系为核供体细胞，可显著提高牛体细胞克隆效率。
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公开(公告)号：CN103215295B
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201310126017.7
申请日：2013-04-11
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/63 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞，包括目的基因Lys，在的基因Lys的上游和下游分别设有5’同源臂和3’同源臂，以牛β-酪蛋白位点第二内含子锌指核酸酶识别位点的上下游各延伸700～850bp的同源序列作为5’同源臂和3’同源臂。本发明使用电穿孔的方法将打靶载体pCSN2-Lys-Neo-EGFP和锌指核酸酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，经过G418药物筛选和PCR分析后获得了打靶的阳性克隆细胞，以打靶的阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚胎，为研制抗乳房炎的转基因奶牛提供坚实的基础。
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公开(公告)号：CN102807993B
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201210319587.3
申请日：2012-08-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种骨骼肌特异性的靶向Myostatin基因的miRNA表达载体及重组细胞，首先构建含有靶向Myostatin基因的pre-miRNA和MYL1基因启动子的骨骼肌特异性miRNA表达载体pmiR-MNM2，然后通过电转染法将外源性表达载体pmiR-MNM2导入红安格斯新生牛成纤维细胞并经G418筛选获得阳性细胞，进行PCR鉴定，证实目的基因整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；将转染pmiR-MNM2的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫，为生产具有双肌性状的红安格斯克隆牛奠定了坚实的基础。
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