一种组织工程化体外三维口腔黏膜实验模型

    公开(公告)号:CN109112096A

    公开(公告)日:2019-01-01

    申请号:CN201811044868.6

    申请日:2018-09-07

    申请人: 程辉

    IPC分类号: C12N5/071

    摘要: 本发明涉及到一种组织工程化体外三维口腔黏膜实验模型,主要包括以下步骤:步骤1:提取小鼠肉瘤细胞中的外基质蛋白做细胞支架;步骤2:将成纤维及上皮细胞分批种植于细胞支架中;步骤3:将步骤2中的基质胶与细胞混合物分批置于Transwell上室和下室中;步骤4:向Transwell上室、下室分别添加上皮专用培养基和普通的DMEM培养基;步骤5:利用气液平面形成角化上皮层,完成体外三维口腔黏膜的建模。既能够形成稳定的细胞分布均匀的体外口腔黏膜模型,且该模型具有良好的可复制性及稳定性,另外降低了建模的技术敏感性,简化了培养材料的种类,节约了资金,缩短了建模周期。

    一种红耳龟胚胎成纤维细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN107858323A

    公开(公告)日:2018-03-30

    申请号:CN201711092592.4

    申请日:2017-11-08

    IPC分类号: C12N5/073 C12N15/85 C12N15/65

    摘要: 本发明公开了一种红耳龟胚胎成纤维细胞系及其构建方法。它是取孵化至第12~18d的红耳龟卵,挑选活胚后对红耳龟卵进行消毒,去壳取红耳龟胚,弃头、四肢及内脏,余下的胚胎组织用含双抗的PBS冲洗至无明显血迹;将冲洗至无明显血迹的胚胎组织用胰蛋白酶消化,收集消化下来的单细胞,将单细胞接种于完全培养基中静置培养,当细胞部分贴壁且稍加振荡也不浮起时,吸去完全培养基和尚未贴壁的细胞,剩下的贴壁细胞加入新的完全培养基后继续培养;当原代培养的细胞汇合度达到90%以上时,用胰蛋白酶消化,收集单细胞,再接种于完全培养基中进行传代培养。本发明为进一步利用RSTEFs进行基础理论和实验研究奠定了材料和技术基础。

    一种人皮肤组织来源成纤维细胞快速分离培养方法

    公开(公告)号:CN107779429A

    公开(公告)日:2018-03-09

    申请号:CN201711281938.5

    申请日:2017-12-07

    IPC分类号: C12N5/077

    CPC分类号: C12N5/0656 C12N2509/00

    摘要: 本发明公开了一种人皮肤组织来源成纤维细胞快速分离培养方法,该方法将成人或儿童术后遗弃的新鲜包皮组织清洗剪切后,依次采用分散酶II溶液和胶原酶IV溶液在37℃,水浴震荡的条件下消化,再经离心收集皮肤组织块,用培养基重悬,在37℃,CO2体积浓度为5%的培养箱中进行培养。本发明将分散酶II和胶原酶IV消化作用的温度由4℃提高到37℃,两种酶的活性均得到提高,通过水浴震荡使两种酶与对应底物的接触面积增大,有利于酶促反应的进行,从而大大缩短了两种酶消化的时间,提高了成纤维细胞分离培养的速度;同时降低了酶对组织细胞的损伤,提高了细胞的贴壁率,得到的原代成纤维细胞培养6~8天即进行传代。