公开(公告)号：CN107779429A

公开(公告)日：2018-03-09

申请号：CN201711281938.5

申请日：2017-12-07

申请人： 陕西九州生物医药科技集团有限公司

发明人： 戴博 ,  聂苏秦 ,  郭康合 ,  何婷婷 ,  王波 ,  董凤娇

IPC分类号： C12N5/077

CPC分类号： C12N5/0656 ,  C12N2509/00

摘要： 本发明公开了一种人皮肤组织来源成纤维细胞快速分离培养方法，该方法将成人或儿童术后遗弃的新鲜包皮组织清洗剪切后，依次采用分散酶II溶液和胶原酶IV溶液在37℃，水浴震荡的条件下消化，再经离心收集皮肤组织块，用培养基重悬，在37℃，CO2体积浓度为5％的培养箱中进行培养。本发明将分散酶II和胶原酶IV消化作用的温度由4℃提高到37℃，两种酶的活性均得到提高，通过水浴震荡使两种酶与对应底物的接触面积增大，有利于酶促反应的进行，从而大大缩短了两种酶消化的时间，提高了成纤维细胞分离培养的速度；同时降低了酶对组织细胞的损伤，提高了细胞的贴壁率，得到的原代成纤维细胞培养6～8天即进行传代。