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公开(公告)号：CN109536625B
公开(公告)日：2023-01-03
申请号：CN201811514557.1
申请日：2018-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种牛支原体的iiPCR检测方法及检测试剂盒。本发明通过以牛支原体的P80基因序列为模板，从P80基因克隆出包含R1序列的M.b序列，以该R1序列为目标设计探针M.b‑specific‑Probe；其中，所述M.b序列如SEQ ID NO：1所示。相应的，本发明的检测试剂盒，其成分除了商品化的Premix Ex Taq外，主要包括特别设计的牛支原体特异性的引物、探针及配套试剂：M.b‑specific‑Forward，M.b‑specific‑Reverse，M.b‑specific‑Probe，Nuclease‑free water，阳性对照模板。本发明除了用于实验室常规检测牛支原体核酸外，特别适用于无实验室条件下(如基层兽医部门、养殖场等)的现场检测，具有高特异性和灵敏性，是一种快速、准确的牛支原体核酸检测试剂盒，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN114924069A
公开(公告)日：2022-08-19
申请号：CN202210524481.0
申请日：2022-05-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , C12Q1/6804 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑2免疫磁珠的直扩检测山羊痘病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的山羊痘病毒单域抗体9‑4‑2通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑2免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑2蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集山羊痘病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了山羊痘病毒由于形成夹皮时间久，不容易在病毒复制高峰期发现，采集病料病毒含量低微，所以检出率低，容易漏检等现象；以及提取基因组DNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，而且高效、灵敏、特异、稳定、实用，本发明的提出为山羊痘病毒病的检测提供了一种高效的技术手段。
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公开(公告)号：CN111323602B
公开(公告)日：2021-09-14
申请号：CN202010178953.2
申请日：2020-03-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，包括如下步骤：(1)将山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株接于MTB培养基中扩培后，菌液离心、灭菌、PBS超声重悬，分离得到抗原；(2)用所述抗原包被酶标板，37℃温箱1h后4℃过夜；加入封闭液，37℃封闭2h；加入200倍稀释的血清样品，37℃孵育1h；加入用5％脱脂奶粉稀释5000倍的兔抗羊二抗，37℃孵育1h；(3)用PBST洗板后加入TMB显色液，37℃孵育10min；加入终止液终止反应；酶标仪读取OD450nm值。本发明iELISA方法敏感性可达98％，操作简单，样本处理量大，不仅可用于Mccp和Mo两种病原血清学阴性羊的筛选，还可用于实验中Mccp抗体水平的监测。
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公开(公告)号：CN111235289A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010178966.X
申请日：2020-03-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的特异性PCR引物，本发明首先通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因测序和对比，筛选到用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的靶序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示，然后设计了检测其的特异性PCR引物，可将Mccp与丝状支原体簇其他成员以及常见反刍动物支原体区分开，显示出良好的特异性，可作为新诊断靶标，以此为基础建立更具临床实用性的Mccp诊断技术。
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公开(公告)号：CN110819684A
公开(公告)日：2020-02-21
申请号：CN201910834074.8
申请日：2019-09-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/04
Abstract: 本发明公开一种简单比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法。发明的方法就将等浓度的经复苏的山羊支原体山羊肺炎亚种接种于鸡胚上，再将接种后的鸡胚置于恒温箱内培养，定时检测鸡胚状态及死亡情况，统计各个菌株的鸡胚致死率，以此进行比较判定。本发明的方法具有操作简单、成本低、无需复杂动物饲养条件、实验动物易得、耗时短、重复性好等优点，大大减少动物试验工作量，避免了现有技术实验动物山羊存在价格较为昂贵、个体差异较大且饲养要求较高、试验操作复杂、试验周期长、工作量大等不足。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107245485A
公开(公告)日：2017-10-13
申请号：CN201710451170.5
申请日：2017-06-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 颜新敏
IPC: C12N15/10
CPC classification number: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种简易滤纸卡的制作方法及应用，步骤1、将三片滤纸按照上层、中间层和下层依次叠放整齐，用订书机将四个边装订整齐；步骤2、在上层滤纸上以1cm的直径画圆圈，每个圆圈之间的间距在1cm，沿圆周从右侧将圆圈剪开四分之三，留有四分之一圆周未剪开，掀开剪开的滤纸片上的半圆片，在相应圆片下的中间层滤纸片上画直径为0.5cm的圆圈，每个圆圈中能保存一种或一份质粒。本发明提供的方法，是将质粒直接点样于经适当剪裁和排列滤纸形成的滤纸卡中，密封于加入干燥剂的简易自封袋中即可。可常温或低温长期保存，不需要复杂的实验室生物操作过程和冻存管等耗材，具有便于携带、使用方便的特点，适合推广应用。
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公开(公告)号：CN104232794B
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201410467843.2
申请日：2014-09-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种可用于检测口蹄疫O型病毒的引物，以及用这些引物制备的检测试剂盒和制备方法。本发明的用于检测口蹄疫O型病毒的引物基因序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、和SEQ ID No.4。相关实验表明，采用本发明的引物序列可特异性快速扩增口蹄疫O型病毒的核酸，通过核酸电泳检测到特异性条带，并具有特异性。本发明能够对口蹄疫病毒进行高通量的定性、定型和定量检测。相比于其他已存在的方法和试剂盒，本发明在用于港口检疫、动物流通环节检疫以及实验室诊断均很大的优势。
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公开(公告)号：CN105754952A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201610087201.9
申请日：2016-02-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开一株可分泌抗羊痘病毒K3L蛋白C末端的单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其分泌的抗羊痘病毒K3L全蛋白的单克隆抗体，以及该杂交瘤细胞株和抗体的应用。本发明的可分泌抗羊痘病毒K3L蛋白C末端单克隆抗体的杂交瘤细胞株K3L35在中国典型培养物保藏中心保藏编号为：CCTCC NO：C2015223。由所述的K3L35杂交瘤细胞株可分泌K3L蛋白C末端单克隆抗体。本发明的K3L35杂交瘤细胞株及所分泌的单克隆抗体可在制备诊断或检测羊痘病毒感染试剂中的应用，也可在制备试验用试剂中的应用。
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公开(公告)号：CN104342501B
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201410465734.7
申请日：2014-09-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种检测猪水泡病病毒的引物、检测试剂盒和制备方法。本发明用于检测猪水泡病病毒的引物基因序列为SEQ ID No.1（SVDV-F）、SEQ ID No.2（SVDV-R）、SEQ ID No.3（UWD-F）、和SEQ ID No.4（UEV-R）。相关的实验表明，本发明的引物序列可特异性快速扩增水疱性口炎病毒的核酸，通过核酸电泳检测到特异性条带，并具有特异性。本发明可在制备快速鉴别猪水泡病病毒的GeXP诊断中的应用，并在猪水泡病流行病学研究中应用。
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公开(公告)号：CN104342500B
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201410464773.5
申请日：2014-09-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种可用于检测口蹄疫Asia 1型病毒的引物及检测试剂盒和制备方法。本发明的一种口蹄疫Asia 1型病毒的检测试剂盒中包括有四条用于GeXP多重基因分析系统的扩增引物。相关的实验表明，本发明的序列FMDV-Asia 1-F和FMDV-Asia 1-R可特异性快速扩增口蹄疫Asia 1型病毒的核酸，通过核酸电泳检测到特异性条带，并具有极高的特异性。本发明GeXP多重基因分析系统能够高通量特异性检测口蹄疫Asia 1型病毒，其灵敏度达到102拷贝。
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