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公开(公告)号：CN103952377B
公开(公告)日：2016-03-30
申请号：CN201410161991.1
申请日：2014-04-21
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N7/00 , C12N5/071 , A61K39/275 , A61P31/20 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种用于羊传染性脓疱病毒分离培养和增殖的细胞系及其制备方法和应用。本发明的一种细胞系是通过对新生牛睾丸原代细胞进行分离和纯化后得到的一种新生牛睾丸支持细胞系。研究结果发现，该细胞系对于接种羊传染性脓疱病毒较为敏感，用该细胞系所增殖的病毒滴度较新生牛睾丸原代细胞高约1个病毒滴度，比MDBK细胞系高1.9个病毒滴度。利用该细胞系分离ORFV病毒可以保证病毒的均一、稳定，同时可以防止因多次利用原代细胞而使所分离的病毒带有其他病原的风险。此外，利用该传代细胞系制备疫苗简化了疫苗的生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的疫苗质量稳定，因此，对疫苗规模化生产具有一定的现实意义。
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公开(公告)号：CN105420409A
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201510719520.2
申请日：2015-10-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12Q2561/113 , C12Q2545/113
Abstract: 一种用于检测猪水泡病病毒的Taqman Real-time RT-PCR试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包含One Step RT-PCR buffer 、酶混合物、阳性对照、无RNA酶水、序列SEQ ID NO:1和 SEQ ID NO:2的引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物；所述使用方法包括使用所述试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤及评定标准。本发明设计了特异性针对猪水泡病病毒的引物及探针，经过前期试验筛选后选取灵敏度和特异性良好的引物及探针，优化反应条件和引物探针应用浓度，优化并组装成试剂盒。本发明能快速、敏感、准确以及低成本地对猪水泡病病毒进行检测及定量分析。
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公开(公告)号：CN103276111B
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201310200393.6
申请日：2013-05-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种用于检测羊痘病毒的检测方法，通过设计一对引物和一条探针对样品的DNA模板进行实时荧光定量PCR检测；本发明还提供了用上述检测方法检测羊痘病毒的试剂盒。本发明用来检测羊痘病毒的试剂盒设计了针对P32的2条特异引物及1条探针，进行羊痘病毒Taqman实时定量PCR检测，针对该基因建立的实时定量方法特异性高，稳定性好；本发明用来检测羊痘病毒的试剂盒，操作简便，用户只需将待检样品的DNA加入反应管中，根据扩增曲线即可得出检测结果，省时省力，成本较低，时间由原来的3-4小时缩短到1-2小时；并且比普通PCR的灵敏度高，可用于检测低微含量的羊痘病毒。
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公开(公告)号：CN102981000B
公开(公告)日：2014-08-06
申请号：CN201210471119.8
申请日：2012-11-20
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68
Abstract: 一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，包括以下步骤：(1)设计针对羊痘病毒主要免疫基因P32的短肽；(2)常规合成肽技术合成肽段；(3)基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒；(4)优化条件，最终制备出检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒。本发明包被用抗原属于体外人工合成的免疫肽片段，减少了使用全病毒的危险性，避免病毒的扩散和逃逸。合成肽纯度高，免疫学特性与羊痘病毒粒子相似，可替代羊痘病毒粒子作为检测用抗原，从而制备出敏感、特异、安全和可靠的羊痘病毒血清抗体检测试剂盒。
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公开(公告)号：CN103893776A
公开(公告)日：2014-07-02
申请号：CN201410101828.6
申请日：2014-03-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K47/46
Abstract: 本发明公开了一种羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗耐热冻干保护剂及其制备方法和应用。本发明针对羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗的特性，制备得到了用于羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗的耐热冻干保护剂，所述的耐热冻干保护剂中含有海藻糖30～70g/L，脱脂奶粉10～30g/L，聚乙烯吡咯烷酮10～30g/L，明胶5～15g/L，精氨酸0.5～4g/L，维生素C1～5g/L，剩余成分为超纯水。本发明的耐热冻干保护剂可以使疫苗在2～8℃保存24个月，病毒效价不发生大的改变，疫苗产品冻干前后病毒损失率为0.3个滴度，在37℃条件下保存30d，病毒损失率仅为1.0个滴度。本发明解决了羊传染性脓疱病毒细胞弱毒疫苗仅能在-15℃条件下保存和运输的瓶颈技术，使疫苗的储存、运输更为方便。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103467599A
公开(公告)日：2013-12-25
申请号：CN201310448137.9
申请日：2013-09-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N15/63 , C12N1/21 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH和用途，以解决现有猪瘟病毒抗原诊断试剂研发过程中存在的无法获得高纯度、高亲和力的抗猪瘟病毒抗体的生产和制备的问题。一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH，所述的抗体具有核苷酸序列：SEQIDNO.1，SEQIDNO.2或SEQIDNO.3。所述的双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH在制备检测猪瘟病毒抗原诊断试剂中的应用。本发明的发明特点是首次获得利用双峰驼筛选获得抗猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株抗原蛋白E2的VHH抗体编码序列；ELISA实验结果表明，E.coli中表达的重组VHH抗体与猪瘟病毒多克隆抗血清具有相同的抗原结合能力，可代替猪瘟病毒多克隆抗体用于猪瘟病毒抗原诊断试剂的研究中。
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公开(公告)号：CN103305637A
公开(公告)日：2013-09-18
申请号：CN201310268535.2
申请日：2013-06-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种用于检测PRRSV的Taqman Real-timeRT-PCR试剂盒，包含OneStepRT-PCRbufferIII、ExTaqHS、PrimerScriptRTEnzymeMixII、阴性对照、阳性对照、以及序列SEQIDNO:1至SEQIDNO:2的扩增引物及SEQIDNO:3的探针引物的混合物。本发明将反转录和PCR扩增过程在一步反应中完成，检测时间缩短，无需电泳就可直观反应检测结果，从而有利于快速检测；同时闭管操作可以有效防止反应产物的污染。本发明使用了探针法，只有当探针特异的结合到扩增靶序列上时才会产生有效的结果，具有更高的准确性，有助于PRRSV的防控和隐性带毒动物的剔除。
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公开(公告)号：CN102888422A
公开(公告)日：2013-01-23
申请号：CN201210361301.8
申请日：2012-09-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种基于羊传染性脓疱病毒B2L基因的DNA疫苗载体及其制备方法和应用，属于生物药物领域。本发明的一种基于羊传染性脓疱病毒B2L基因的DNA疫苗载体，其特征是将羊传染性脓疱病毒主要免疫原性基因B2L插入到真核表达载体pVAX1内经大量制备后得到的。将本发明的制备得到DNA疫苗用于动物免疫，结果发现，与对照组相比，注射了本发明的DNA疫苗的动物能够有效抵抗羊传染性脓疱病毒的感染，其免疫保护效率达90%以上，因此本发明的一种DNA疫苗在防治羊传染性脓疱疾病方面将具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN102766207A
公开(公告)日：2012-11-07
申请号：CN201210249621.4
申请日：2012-07-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗猪圆环病毒2型的双峰驼单域重链抗体及其制备方法和用途，属于生物技术领域。本发明首次利用PCV2灭活疫苗免疫双峰驼，利用噬菌体展示技术建立PCV 2免疫VHH抗体库，筛选与PCV特别是PCV 2型病毒抗原具有良好亲和力的高特异性单域重链抗体（VHH），本发明所述的抗体具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO.1所示的序列同源性在95%以上的氨基酸序列。本发明的PCV 2单域重链抗体对于研究猪圆环病毒，特别是对于研究猪圆环病毒2型的感染机理和建立高度敏感和特异的抗原快速检测或诊断试剂具有重要意义。
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公开(公告)号：CN101418303B
公开(公告)日：2011-04-06
申请号：CN200810150304.0
申请日：2008-07-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/40 , C12N15/70 , C07K14/08 , A61K39/187 , A61P31/14
Abstract: 一种猪瘟重组亚单位疫苗的制备方法，包括下述步骤：A.利用逆转录-聚合酶链式反应方法克隆猪瘟疫苗株E2蛋白的编码基因；B.构建融合E2基因；C.构建重组表达载体rE2；D.rE2的诱导表达：E.rE2纯化。F.Western blotting方法检测rE2活性。本发明创造性地以双E2基因串联表达方式使E2抗原表位的数量增加一倍，显著提高了重组E2亚单位疫苗的免疫效果；为提高双E2蛋白表达效率，在第二个E2基因5′端起始密码子(ATG)上游增加一个大肠杆菌RBS序列(5`-AAGGAG-3`)；同时在串联的E2基因之间增加氨基酸接头5`-GSA GSAAGS GEF-3`，使获得的E2蛋白能够完整展示其抗原表位。本发明的E2蛋白重组亚单位疫苗，免疫保护效果与猪瘟兔化弱毒疫苗相当。
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