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公开(公告)号：CN106591373B
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201611208509.0
申请日：2016-12-23
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 一种用于增强PPRV复制的敏感细胞亚克隆Vero/Slam的制备方法，包含山羊淋巴细胞信号活化因子Slam引物序列，Slam慢病毒表达载体构建，Slam复制缺陷型慢病毒的获得，Slam慢病毒感染靶标细胞Vero，敏感细胞亚克隆Vero/Slam的筛选、验证，增强小反刍兽疫病毒PPRV易感性的验证等。本发明包括具有提高PPRV复制能力的阳性细胞亚克隆，该细胞亚克隆具有良好的生物学特性以及遗传稳定性，其稳定表达的Slam具有明显增强PPRV复制的功效。
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公开(公告)号：CN106086240B
公开(公告)日：2019-12-13
申请号：CN201610536967.0
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6804
Abstract: 本发明公开了一种用于检测小反刍兽疫病毒抗原的免疫磁珠试剂盒及其用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV F蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN106244525B
公开(公告)日：2019-06-18
申请号：CN201610674346.9
申请日：2016-08-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种心肌细胞与睾丸支持细胞的联合培养方法。所述的联合培养方法包括以下步骤：(1)睾丸支持细胞的培养；(2)心肌组织收集、处理及消化，以获得心肌细胞；(3)采用双层培养法，用睾丸支持细胞联合培养心肌细胞，其中上层为睾丸支持细胞层，下层为心肌细胞；(4)分离、纯化培养的心肌细胞。本发明通过试验发现，用睾丸支持细胞联合培养心肌细胞，相比常规培养组，联合培养组细胞生长速度加快，细胞生长更加旺盛。联合培养组细胞铺满单层需要3‑4d，而常规培养组需要4‑5d。由此证明，睾丸支持细胞可有效促进心肌细胞生长。这种简单且低成本的心肌细胞培养方法，对心脏的生长、发育、生理、代谢、病理研究有重要的现实意义。
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公开(公告)号：CN105504053B
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201510985596.X
申请日：2015-12-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。
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公开(公告)号：CN109486974A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811528070.9
申请日：2018-12-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于基因工程技术和诊断试剂技术领域，具体涉及一种布鲁氏杆菌重组酶聚合酶扩增(RPA)检测试剂盒及应用，所述检测试剂盒包括特异性引物组和探针。本发明以试纸条检测RPA扩增产物，只需10min左右扩增后，滴加至试纸条内读取结果，不需要PCR扩增仪器及定量PCR仪。所得的方法具有特异性强、敏感性好、操作过程简单、检测快速等优点，为野外田间布病的检测提供了一种可能，也为不以疾病的诊断和治疗为目的的对布鲁氏杆菌的研究提供了一种方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109266614A
公开(公告)日：2019-01-25
申请号：CN201810942657.8
申请日：2018-08-17
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N5/10 , C12N15/867
Abstract: 本发明提供一种基于小反刍兽疫病毒受体的细胞BHK/slam，其保藏号为：CCTCC NO:C201895，该细胞表达的小反刍兽疫病毒受体-山羊淋巴细胞信号活化因子完整ORF具有明显增强小反刍兽疫病毒复制的功能，该细胞通过过量表达小反刍兽疫病毒特定细胞受体缩短了致细胞病变后的收毒时间（从4-7d缩短到3-4d），提高了小反刍兽疫病毒毒价（ct值从20.66提高到16.91），同体积病毒拷贝数也得到了大幅度增加（拷贝数从4.1X107提高到5.3X108），同时节约了成本。为小反刍兽疫病毒分离及疫苗毒生产提供了良好工具，也为小反刍兽疫病毒致病机制研究提供细胞模型。本发明还提供了该细胞的制备及应用。
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公开(公告)号：CN104800842B
公开(公告)日：2017-06-23
申请号：CN201510172159.6
申请日：2015-04-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K39/275 , A61K47/42 , A61P31/20
Abstract: 本发明提供一种山羊痘、绵羊痘二价细胞弱毒疫苗，有效成分包括山羊痘病毒细胞传代致弱毒以及绵羊痘病毒细胞传代致弱毒；其中，山羊痘病毒细胞传代致弱毒为山羊痘病毒细胞传代致弱疫苗株Goatpox Virus HN‑XY2010F43株CCTCC V201503，绵羊痘病毒细胞传代致弱毒为绵羊痘病毒细胞传代致弱疫苗株Sheeppox Virus GS‑WW 2010 F44株CCTCC V201504。本发明的山羊痘、羊口疮病毒二联细胞弱毒疫苗安全，且能够产生有效的免疫保护力。本发明对于研制安全高效的弱毒疫苗以及用本发明公开的弱毒株规模化生产山羊痘、绵羊痘病毒二价细胞弱毒疫苗来防控山羊痘和绵羊痘具有重要的现实意义。
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公开(公告)号：CN106755110A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611208506.7
申请日：2016-12-23
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 一种用于增强PPRV复制的敏感细胞亚克隆Vero/Slam/V的制备方法，包含山羊淋巴细胞信号活化因子Slam/V引物序列，slam/V慢病毒表达载体构建，slam/V复制缺陷型慢病毒的获得，slam/V慢病毒感染靶标细胞Vero，敏感细胞亚克隆Vero/Slam/V的筛选、验证，增强小反刍兽疫病毒易感性的验证等。本发明包括具有提高PPRV复制能力的阳性细胞亚克隆，该阳性细胞亚克隆具有良好的生物学特性以及遗传稳定性，其稳定表达的Slam/V具有明显增强PPRV复制的功效。
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公开(公告)号：CN106591373A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201611208509.0
申请日：2016-12-23
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 一种用于增强PPRV复制的敏感细胞亚克隆Vero/Slam的制备方法，包含山羊淋巴细胞信号活化因子Slam引物序列，Slam慢病毒表达载体构建，Slam复制缺陷型慢病毒的获得，Slam慢病毒感染靶标细胞Vero，敏感细胞亚克隆Vero/Slam的筛选、验证，增强小反刍兽疫病毒PPRV易感性的验证等。本发明包括具有提高PPRV复制能力的阳性细胞亚克隆，该细胞亚克隆具有良好的生物学特性以及遗传稳定性，其稳定表达的Slam具有明显增强PPRV复制的功效。
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公开(公告)号：CN105504053A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201510985596.X
申请日：2015-12-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C07K16/10
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。
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