猪链球菌SBP_bac_5基因缺失株及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN104762244B

    公开(公告)日:2017-09-15

    申请号:CN201510058245.4

    申请日:2015-02-04

    Abstract: 本发明公开了一种猪链球菌SBP_bac_5基因缺失株及其构建方法与应用。所述缺失株为不含抗性标记的SS△SBP_bac_5,保藏编号为:CGMCC No.10076。本发明是采用RecA同源重组系统,利用温敏自杀质粒pSET4s作为载体对猪链球菌7型菌株SBP_bac_5编码的基因进行敲除而得到的菌株,破坏了SBP_bac_5蛋白的表达。本发明得到的S.suis 7型SS△SBP_bac_5株比亲本株的毒力弱,对动物安全。用重组菌制成疫苗,免疫CD1小鼠,实验结果表明:该猪链球菌重组菌疫苗能有效诱导机体产生特异性的体液免疫应答,使免疫小鼠获得抗S.suis攻击的保护,并可有效阻止细菌在体内的增值。本发明得到的工程菌为猪链球菌疫苗的研制提供了重要依据。

    I型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒双重荧光定量PCR方法

    公开(公告)号:CN106755572A

    公开(公告)日:2017-05-31

    申请号:CN201611080993.3

    申请日:2016-11-30

    Abstract: 本发明提供一种I型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒双重荧光定量PCR方法,分别设计了一对针对I型鸭肝炎病毒的特异性检测引物DHV‑I‑F、DHV‑I‑R及一条荧光探针DHV‑I‑P,一对针对鸭瘟病毒的特异性检测引物DPV‑F、DPV‑R及一条荧光探针DPV‑P,并确定了针对I型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的双重荧光定量PCR方法的特异性引物及荧光探针的浓度。本发明提供的双重荧光定量PCR方法可以同时检测和鉴别I型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒两种病毒,具有操作简单、敏感性高、特异性强、重复性好等优点,不仅可以节约成本、还可以为疫情监测和疫情控制争取到宝贵的时间,并且为这两种病毒所引起的传染性鸭病的早期快速诊断、监测和流行病学调查等研究提供有效手段。

    表达绿色荧光蛋白的限制性复制西尼罗病毒系统及其应用

    公开(公告)号:CN106754982A

    公开(公告)日:2017-05-31

    申请号:CN201611154016.3

    申请日:2016-12-14

    Inventor: 华荣虹 步志高

    Abstract: 本发明公开了一种表达绿色荧光蛋白的限制性复制西尼罗病毒系统及其应用。本发明所述的表达绿色荧光蛋白的限制性复制西尼罗病毒系统包括西尼罗病毒限制性复制子质粒以及稳定表达西尼罗病毒C‑prM‑E蛋白的重组细胞系。使用本发明的系统获得的限制性复制西尼罗病毒(△WNV),该病毒在BWNV‑CME细胞系中具有与WNV全病毒相似的特性,且可以表达GFP,具有可视化效果,更重要的是,该病毒只能在本系统内进行复制,感染其他细胞时则不能产生仔代病毒,因此具有极高的安全性,可用于WNV中和抗体检测以及抗病毒药物筛选。本发明的提出提高了WNV相关操作的安全性与简便性,不依赖于BSL‑3高等级生物安全条件,为WNV疫苗评价、抗病毒药物筛选及病毒致病机制研究提供了良好的技术手段。

    产气荚膜梭菌ε毒素减毒突变体及其应用

    公开(公告)号:CN104560780B

    公开(公告)日:2017-04-12

    申请号:CN201410707351.6

    申请日:2014-11-28

    Abstract: 本发明公开了产气荚膜梭菌ε毒素减毒突变体及其应用。本发明将野生型产气荚膜梭菌ε毒素成熟毒素的第71位酪氨酸突变为非芳香族氨基酸,获得了对于细胞或动物体减毒的ε毒素突变体。本发明进一步公开了含有所述产气荚膜梭菌ε毒素减毒突变体编码基因的重组表达载体和重组宿主细胞。本发明重组表达的产气荚膜梭菌ε毒素减毒突变体在体外以及小鼠体内均实现完全减毒且在小鼠模型中呈现良好的免疫原性和免疫保护性。本发明的产气荚膜梭菌ε毒素减毒突变体或其编码基因能够应用于制备预防产气荚膜梭菌病的ε毒素亚单位疫苗或多价梭菌毒素亚单位疫苗。

    I型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法

    公开(公告)号:CN106399591A

    公开(公告)日:2017-02-15

    申请号:CN201611029922.0

    申请日:2016-11-15

    Abstract: 本发明提供了一种鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法,首先分别选取鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒中高度保守的基因为目标片段I和目标片段Ⅱ,设计并合成相应的特异性引物I和特异性引物Ⅱ;然后分别对鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因组RNA和DNA进行提取,将其混合作为模板,进行二重PCR扩增;最后用琼脂糖凝胶电泳对得到的二重PCR产物进行分析。本发明提供的鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法操作简单、省时省力,可以在同一个反应体系中进行PCR和RT-PCR,同时对DNA病毒(鸭瘟病毒)和RNA病毒(鸭肝炎病毒)进行扩增和检测,大大减少分别检测所花费的时间和人力成本;本方法具有良好的特异性,能够扩增出高度特异的片段,并且产物杂质极少,适合推广使用。

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