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公开(公告)号：CN106086239A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610536855.5
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于小反刍兽疫病毒抗原检测的免疫磁珠试剂盒及其用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV全病毒IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN104086652B
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201410304607.9
申请日：2014-06-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗O型口蹄疫病毒特异性单域抗体及其重组表达载体，该抗O型口蹄疫病毒特异性单域抗体具有核苷酸序列：SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2。本发明以O型口蹄疫病毒灭活疫苗免疫双峰驼，利用噬菌体展示技术建立抗FMDV O型 VHH免疫抗体库，以重组VP1蛋白作为筛选用抗原，通过3轮高强度淘洗，筛选得到与VP1抗原亲和力强的2株特异性抗FMDV 血清O型的重链抗体序列，并将其分别克隆到原核表达载体中，在E.coli中完成了可溶性表达，亲和层析纯化的VHH抗体蛋白能够特异性的同O型FMDV全病毒抗原和重组VP1蛋白特异性相互作用，与FMD病毒Asia 1和A型不发生交叉反应，具备了同常规IgG抗体相同的生物学功能。
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公开(公告)号：CN103467599B
公开(公告)日：2015-06-17
申请号：CN201310448137.9
申请日：2013-09-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N15/63 , C12N1/21 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH和用途，以解决现有猪瘟病毒抗原诊断试剂研发过程中存在的无法获得高纯度、高亲和力的抗猪瘟病毒抗体的生产和制备的问题。一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH，所述的抗体具有核苷酸序列：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3。所述的双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH在制备检测猪瘟病毒抗原诊断试剂中的应用。本发明的发明特点是首次获得利用双峰驼筛选获得抗猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株抗原蛋白E2的VHH抗体编码序列；ELISA实验结果表明，E.coli中表达的重组VHH抗体与猪瘟病毒多克隆抗血清具有相同的抗原结合能力，可代替猪瘟病毒多克隆抗体用于猪瘟病毒抗原诊断试剂的研究中。
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公开(公告)号：CN104178499A
公开(公告)日：2014-12-03
申请号：CN201410413777.0
申请日：2010-07-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了编码PCV2检测用的ORF2抗原功能区的基因片段，具有序列表SEQ ID NO：1所示的DNA序列。在此基础上，本发明还公开了上述基因片段的表达方法。基于本发明公开的基因片段所表达的蛋白序列可有效用于PCV2的检测，具有快速、敏感的且能将PCV1和PCV2两种血清型病毒感染有效区分。
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公开(公告)号：CN103255234A
公开(公告)日：2013-08-21
申请号：CN201310199211.8
申请日：2013-05-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的检测方法，通过设计一对引物和一条探针对样品的DNA模板进行实时荧光定量PCR检测，本发明还提供了利用上述检测方法检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒。本发明针对ORFV的保守区域H2L基因建立的实时定量方法特异性高，稳定性好；本发明用来检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒，操作简便，用户只需将待检样品的DNA加入反应管中，根据扩增曲线即可得出检测结果，省时省力，成本较低，时间由原来的3-4小时缩短到1-2小时；并且比普通PCR的灵敏度高，可用于检测低微含量的羊传染性脓包皮炎病毒，可适用于我国各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等，具有较好的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102140540B
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201110035770.6
申请日：2011-01-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种用于检测猪瘟病毒的试剂盒，包含RNA酶抑制剂、AMV(禽成髓细胞性白血病病毒)逆转录酶、Taq酶(耐热脱氧核糖核酸聚合酶)、无RNA酶水、One Step RNA PCR(一步RNA聚合酶链反应)混合液、阴、阳性对照以及序列SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6引物的混合物。本发明在检测过程中将反转录和PCR扩增过程在一步反应中完成，使得检测时间由原来的4-5小时缩短到现在的2-3小时，从而有利于快速检测。同时本发明使用了三对引物，使该方法与普通PCR方法相比具有更高的敏感性，有助于CSFV的防控和隐性带毒动物的剔除，避免造成大范围的传染。所述方法适用于任何实验室和基层各级防控单位、兽医站及大中小型养殖场等。
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公开(公告)号：CN102981000A
公开(公告)日：2013-03-20
申请号：CN201210471119.8
申请日：2012-11-20
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68
Abstract: 一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，包括以下步骤：(1)设计针对羊痘病毒主要免疫基因P32的短肽；(2)常规合成肽技术合成肽段；(3)基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒；(4)优化条件，最终制备出检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒。本发明包被用抗原属于体外人工合成的免疫肽片段，减少了使用全病毒的危险性，避免病毒的扩散和逃逸。合成肽纯度高，免疫学特性与羊痘病毒粒子相似，可替代羊痘病毒粒子作为检测用抗原，从而制备出敏感、特异、安全和可靠的羊痘病毒血清抗体检测试剂盒。
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公开(公告)号：CN101463395B
公开(公告)日：2013-02-20
申请号：CN200810241706.1
申请日：2008-12-26
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种用于检测猪繁殖与呼吸综合症病毒的试剂盒和检测方法，所述试剂盒包含RNA酶抑制剂、AMV逆转录酶、Taq酶、无RNA酶水、One Step RNA PCR混合液、阴性对照以及序列SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6引物的混合物，所述检测包括使用所述试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤。所述方法能快速、敏感、准确以及低成本地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒。
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公开(公告)号：CN101418304B
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：CN200810150305.5
申请日：2008-07-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种制备用于检测猪瘟病毒血清抗体的可溶性E2抗原的方法，包括下述步骤：A.克隆E2基因抗原结构域部分；B.构建重组表达载体；C.在LB培养基中表达，获得可溶性的重组E2蛋白；D.亲和层析纯化重组E2蛋白；E.pGST-E2表达蛋白的鉴定，SDS-PAGE和Western Blotting鉴定表达的重组E2蛋白；F.利用重组E2蛋白建立检测猪瘟血清抗体间接ELISA方法。本发明改良了传统的LB培养基，促进可溶性的E2蛋白表达；解决了猪瘟病毒E2抗原在大肠杆菌中主要以包涵体表达的难题，获得的可溶性E2蛋白与完整猪瘟病毒粒子具有相似的免疫学效果，可作为替代猪瘟病毒粒子的抗原，建立敏感性、特异、安全和可靠的猪瘟病毒血清抗体的检测间接ELISA方法。
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公开(公告)号：CN102140540A
公开(公告)日：2011-08-03
申请号：CN201110035770.6
申请日：2011-01-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种用于检测猪瘟病毒的试剂盒，包含RNA酶抑制剂、AMV(禽成髓细胞性白血病病毒)逆转录酶、Taq酶(耐热脱氧核糖核酸聚合酶)、无RNA酶水、One Step RNA PCR(一步RNA聚合酶链反应)混合液、阴、阳性对照以及序列SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6引物的混合物。本发明在检测过程中将反转录和PCR扩增过程在一步反应中完成，使得检测时间由原来的4-5小时缩短到现在的2-3小时，从而有利于快速检测。同时本发明使用了三对引物，使该方法与普通PCR方法相比具有更高的敏感性，有助于CSFV的防控和隐性带毒动物的剔除，避免造成大范围的传染。所述方法适用于任何实验室和基层各级防控单位、兽医站及大中小型养殖场等。
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