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公开(公告)号：CN118546850A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410781391.9
申请日：2022-09-29
申请人： 浙江大学杭州国际科创中心
摘要： 本发明公开了一种高产重组蛋白的需钠弧菌工程菌及其应用，该工程菌包括需钠弧菌和在需钠弧菌内表达且自我复制的重组质粒，所述需钠弧菌的基因组中整合了含启动子tet和RBS为RBS1的T7RNA聚合酶表达盒；所述重组质粒中包含有外源重组蛋白的基因，且所述基因的上游含有T7启动子；所述tet启动子的碱基序列如SEQ ID NO.1所示；所述RBS1的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过对需钠弧菌基因组中T7RNA聚合酶的上游序列进行天然转化，获得了能够高表达外源导入重组质粒上的重组蛋白(尤其是葡萄糖脱氢酶)，可显著提高工程菌外源蛋白的产量，具有推广应用前景。
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公开(公告)号：CN115960801B
公开(公告)日：2024-07-09
申请号：CN202211192796.6
申请日：2022-09-28
申请人： 浙江大学杭州国际科创中心
摘要： 本发明公开了一种高产L‑苏氨酸的基因工程菌及其应用，该基因工程菌的宿主细胞为需钠弧菌ATCC14048，宿主细胞基因组中的TDH基因、THRL基因被敲除，THRA基因的第433位甘氨酸突变为精氨酸；TDH基因、THRL基因和THRA基因的的碱基序列依次如SEQ ID NO.1、2和3所示；重组质粒包含有RHTC基因；RHTC基因的碱基序列如SEQ ID NO.4所示。本发明通过天然转化的基因编辑方法实现了2个基因的敲除和1个基因的点突变，并通过质粒过表达1个外源基因，首次构建获得能通过发酵法生产L‑苏氨酸的需钠弧菌，该工程菌生长周期短，能高产L‑苏氨酸，具有潜在商业应用前景。
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公开(公告)号：CN117777252A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311756715.5
申请日：2023-12-20
申请人： 浙江大学
IPC分类号： C07K14/195 , B01J31/22 , C07C29/141 , C07C33/22 , C07C29/145 , C07C33/46 , C07C33/18 , C07D213/30 , C07B41/02 , C12N15/70
摘要： 本发明公开了一种基于TM1459蛋白支架的人工金属酶及其制备方法和应用，该发明包括：以TM1459蛋白支架突变体为骨架，配位连接ZnⅡ离子，形成锌离子‑蛋白质复合的人工金属酶；TM1459蛋白支架突变体由如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列突变而得；突变位点为以下之一：(1)H52A、H58A、H92A中任意一种；(2)H58A/H92A。本发明首次构建了一种新型的人工金属酶，与现有的人工金属酶相比具有优秀的催化活性，且对映选择性较高，可实现不同的对映选择性，可用于催化水中的不对称转移氢化反应。
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公开(公告)号：CN117700452A
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202211099290.0
申请日：2022-09-08
申请人： 浙江新安化工集团股份有限公司 , 浙江大学
IPC分类号： C07F9/30
摘要： 本发明提供了一种4‑(羟基甲基膦酰基)‑2‑羰基丁酸的制备方法，包括以下步骤：a)将甲基亚膦酸二酯、羧酸和丙烯酰氯混合，进行加成反应，减压蒸馏后得到(3‑氯‑3‑羰基丙基)甲基膦酸酯料液；b)将步骤a)得到的(3‑氯‑3‑羰基丙基)甲基膦酸酯料液与氰化钠、溶剂、催化剂混合，进行取代反应，纯化后得到(3‑氰基‑3‑羰基丙基)甲基膦酸酯料液；c)将步骤b)得到的(3‑氰基‑3‑羰基丙基)甲基膦酸酯料液与水混合均匀，降温到10℃～40℃，再滴加盐酸进行酸化，滴加完毕后继续搅拌0.1h～1h，然后进行水解反应，最后经纯化处理，得到4‑(羟基甲基膦酰基)‑2‑羰基丁酸。与现有技术相比，本发明提供的制备方法工艺步骤简单，反应条件温和，元素综合利用率较高。
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公开(公告)号：CN117700450A
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202211096101.4
申请日：2022-09-08
申请人： 浙江新安化工集团股份有限公司 , 浙江大学
IPC分类号： C07F9/30 , C07F9/32 , C07C253/14 , C07C255/17
摘要： 一种4‑(羟基甲基膦酰基)‑2‑羰基丁酸的制备方法，包括以下步骤：a)将3‑氯丙酰氯、第一溶剂、三甲基硅氰和氰化盐混合，进行取代反应，得到含有4‑氯‑2‑氧代丁腈的料液，再经减压蒸馏，分离得到4‑氯‑2‑氧代丁腈中间体；b)将得到的4‑氯‑2‑氧代丁腈中间体与甲基亚膦酸二酯在碘化亚铜存在下于第二溶剂中进行Arbuzov反应，得到(3‑氰基‑3‑氧代丙基)甲基次膦酸酯料液，纯化后得到(3‑氰基‑3‑氧代丙基)甲基次膦酸酯粗品；c)将得到的(3‑氰基‑3‑氧代丙基)甲基次膦酸酯粗品与盐酸混合，进行水解反应，再经纯化处理，得到4‑(羟基甲基膦酰基)‑2‑羰基丁酸。该制备方法能够高收率地获得4‑(羟基甲基膦酰基)‑2‑羰基丁酸，反应条件温和，操作简便，生产成本低，易于实现工业化。
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公开(公告)号：CN117700447A
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202211096078.9
申请日：2022-09-08
申请人： 浙江新安化工集团股份有限公司 , 浙江大学
IPC分类号： C07F9/30
摘要： 本发明提供了一种4‑(羟基甲基膦酰基)‑2‑羰基丁酸的制备方法，包括以下步骤：a)将甲基亚膦酸单酯、第一溶剂、引发剂和丙烯酰氯混合，进行加成反应，减压蒸馏后得到(3‑氯‑3‑羰基丙基)甲基膦酸酯料液；b)将步骤a)得到的(3‑氯‑3‑羰基丙基)甲基膦酸酯料液与氰化钠、第二溶剂、催化剂混合，进行取代反应，纯化后得到(3‑氰基‑3‑羰基丙基)甲基膦酸酯料液；c)将步骤b)得到的(3‑氰基‑3‑羰基丙基)甲基膦酸酯料液与水混合均匀，降温到10℃～40℃，再滴加盐酸进行酸化，滴加完毕后继续搅拌0.1h～1h，然后进行水解反应，最后经纯化处理，得到4‑(羟基甲基膦酰基)‑2‑羰基丁酸。与现有技术相比，该制备方法工艺步骤简单，反应条件温和，元素综合利用率较高。
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公开(公告)号：CN113337494B
公开(公告)日：2023-12-26
申请号：CN202110571939.3
申请日：2020-01-17
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种L‑苏氨酸醛缩酶突变体及其应用。所述L‑苏氨酸醛缩酶突变体由野生型L‑苏氨酸醛缩酶突变所得，能够以甘氨酸和对甲砜基苯甲醛为底物，以磷酸吡哆醛为辅酶，催化缩合反应生成L‑syn‑对甲砜基苯丝氨酸。使用本发明L‑苏氨酸醛缩酶突变体生产L‑syn‑对甲砜基苯丝氨酸具有以下优点：1、生产工艺简单，反应条件温和；2、L‑苏氨酸醛缩酶的选择性高，产品光学纯度高，无需拆分；3、原子利用率高，理论可达100％；4、生产过程环保，污染较小，符合绿色化学理念；5、产品分离纯化简单。
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公开(公告)号：CN113249366B
公开(公告)日：2023-12-19
申请号：CN202110573676.X
申请日：2020-01-17
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种L‑苏氨酸醛缩酶突变体、基因及应用。所述L‑苏氨酸醛缩酶突变体由野生型L‑苏氨酸醛缩酶突变所得，能够以甘氨酸和对甲砜基苯甲醛为底物，以磷酸吡哆醛为辅酶，催化缩合反应生成L‑syn‑对甲砜基苯丝氨酸。使用本发明L‑苏氨酸醛缩酶突变体生产L‑syn‑对甲砜基苯丝氨酸具有以下优点：1、生产工艺简单，反应条件温和；2、L‑苏氨酸醛缩酶的选择性高，产品光学纯度高，无需拆分；3、原子利用率高，理论可达100％；4、生产过程环保，污染较小，符合绿色化学理念；5、产品分离纯化简单。
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公开(公告)号：CN115747194B
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202211331664.7
申请日：2022-10-28
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种L‑苏氨酸醛缩酶突变体、基因及制备L‑anti‑对甲砜基苯丝氨酸的方法。所述L‑苏氨酸醛缩酶突变体由野生型L‑苏氨酸醛缩酶突变所得，能够以甘氨酸和对甲砜基苯甲醛为底物，以磷酸吡哆醛为辅酶，催化缩合反应生成L‑anti‑对甲砜基苯丝氨酸。使用本发明L‑苏氨酸醛缩酶突变体生产L‑anti‑对甲砜基苯丝氨酸具有以下优点：1、生产工艺简单，反应条件温和；2、L‑苏氨酸醛缩酶的选择性高，产品光学纯度高，无需拆分；3、原子利用率高，理论可达100％；4、生产过程环保，污染较小，符合绿色化学理念；5、产品分离纯化简单。
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公开(公告)号：CN116376940A
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202310221079.X
申请日：2023-03-09
申请人： 浙江新安化工集团股份有限公司 , 浙江大学杭州国际科创中心
摘要： 本发明涉及生物化工技术领域，具体涉及一种表达D‑氨基酸氧化酶的方法及其应用。本发明通过筛选获得了对催化底物DL‑草铵膦具有催化活力的野生型D‑氨基酸氧化酶，并通过对表达宿主的筛选以及添加分子伴侣等方法，使得宿主表达获得的D‑氨基酸氧化酶的活性和可溶性表达进一步提高。利用本发明提供的D‑氨基酸氧化酶制备α‑酮酸的方法实现了外消旋草铵膦的动力学拆分，能够广泛应用到L‑草铵膦的生产应用中。
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