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公开(公告)号：CN114703170B
公开(公告)日：2023-11-28
申请号：CN202210448238.5
申请日：2022-04-26
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的热稳定性突变体及其高通量筛选方法，属于酶工程领域。该高通量筛选方法经过两轮叠加筛选获得的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶三点突变体热稳定性明显提高。该突变体与野生型相比，5min热处理的半失活温度从58.9℃升高至66.0℃，60℃热处理温度下半衰期从2.06min增加至19.52min，同时三点突变体的比酶活从野生型的214.6U/mg增加至338.5U/mg。
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公开(公告)号：CN115927436A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202211506223.6
申请日：2022-11-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明提供了一种合成24‑表麦角固醇真菌的构建方法及其应用。将甾醇Δ24(28)还原酶DWF1基因或其突变体基因重组表达到产麦角固醇的真菌体内，构建得到合成24‑表麦角固醇的菌株；通过DWF1的定向进化提高其在真菌中对非天然底物24(28)‑脱氢麦角固醇的还原能力，结合高密度发酵，24‑表麦角固醇的产量提高至841.2mg/L；采用增强酯化、水解从而提升甾醇平衡的合成生物学策略，提高真菌内向24‑表麦角固醇的代谢流，并优化DWF1、ACC1基因的启动子、过表达ERG5，提高24‑表麦角固醇在甾醇中的比例，结合高密度发酵，使24‑表麦角固醇的产量提高至2.76g/L。
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公开(公告)号：CN114703170A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210448238.5
申请日：2022-04-26
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的热稳定性突变体及其高通量筛选方法，属于酶工程领域。该高通量筛选方法经过两轮叠加筛选获得的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶三点突变体热稳定性明显提高。该突变体与野生型相比，5min热处理的半失活温度从58.9℃升高至66.0℃，60℃热处理温度下半衰期从2.06min增加至19.52min，同时三点突变体的比酶活从野生型的214.6U/mg增加至338.5U/mg。
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公开(公告)号：CN110734479B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN201910989216.8
申请日：2019-10-17
Applicant: 浙江大学
IPC: C07K14/245 , C12N15/31 , C12P7/18 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌环腺苷酸受体蛋白突变体、基因工程菌及应用。本发明通过将大肠杆菌的环腺苷酸受体蛋白(CRP)112位氨基酸I突变为L、127位T突变为G、144位A突变为T获得CRPG菌株，与ptsG基因敲除的ΔptsG方案组合应用于生产木糖醇的大肠杆菌，菌株彻底消除CCR效应，大幅提高木糖醇浓度和生产效率，同时提高其对水解液原料中毒物和抑制因子的耐受性，直接利用离子交换前的半纤维素水解液高效生产木糖醇，简化原料处理工艺，减少设备投入，降低生产成本，减少污水排放。
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公开(公告)号：CN112342209A
公开(公告)日：2021-02-09
申请号：CN202011348306.8
申请日：2020-11-26
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种氨基甲酸乙酯水解酶突变体及其应用。所述氨基甲酸乙酯水解酶突变体由根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)d3的酰胺酶基因经过突变得到，野生型酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述氨基甲酸乙酯水解酶突变体由野生型酰胺酶经过R94P、I97L、S177C或G195A中的至少一个位点突变所得。发明筛选得到来自Agrobacterium tumefaciens d3的酰胺酶，在乙醇浓度0％‑20％之间，剩余酶活高于90％，高于25％之后酶活下降迅速，该酶对低浓度乙醇表现出极好的耐受性。通过半理性改造，构建了一个21个点突变的突变体库，并从中筛选得到4个酶活有提高的突变位点(R94P、I97L、S177C、G195A)，组合突变株I97L/G195A酶活提高了5.2倍，由原来的395U/L提高到2442U/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111751274A
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN202010680762.6
申请日：2020-07-15
IPC: G01N19/04
Abstract: 本发明提供了一种用于构件界面粘结性能单剪试验的装置，包括支座底部钢板，支座顶部钢板以及连接支座底部钢板和支座顶部钢板的连接螺栓；所述支座底部钢板，支座顶部钢板的上表面和下表面分别通过螺母与所述连接螺栓连接，通过调整螺母相对于连接螺栓的位置，调节支座底部钢板，支座顶部钢板之间的距离；所述支座底部钢板的上表面设置有四个限位钢片，每一个限位钢片分别与支座底部钢板的一条边平行；每一个限位钢片分别连接有限位螺栓，各个限位螺栓向着支座底部钢板的中轴线延伸靠近，并限定出用于安装实验支座的空间；所述支座底部钢板的下表面固定设置有固定螺母，所述固定螺母用于与反力墙或者来及的固定螺栓连接。
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公开(公告)号：CN111440830A
公开(公告)日：2020-07-24
申请号：CN202010151651.6
申请日：2020-03-06
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种玉米芯水解液发酵生产木糖醇的方法包括以下步骤：(1)获取未经离子交换的玉米芯半纤维素水解液，中和至pH不大于5.5，然后过滤除杂；(2)将步骤(1)处理后的玉米芯半纤维素水解液灭菌，灭菌温度100～105℃，灭菌时间30～40min；(3)将步骤(2)灭菌后的玉米芯半纤维素水解液与发酵培养基和发酵菌株混匀后进行发酵。本发明研究发现，使用灭菌温度100～105℃进行灭菌取代常用的115℃灭菌，能够大大降低灭菌过程中木糖的损失，并且经验证并没有微生物残留，不会影响发酵使用菌种的生长，提高生物法发酵玉米芯水解液生产木糖醇时的得率。
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公开(公告)号：CN109468301A
公开(公告)日：2019-03-15
申请号：CN201811524189.9
申请日：2018-12-13
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的脂肪酶突变体及其制备方法和应用，属于分子生物学技术领域。所述脂肪酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.13所示。本发明通过多序列比对和二硫键预测结果，对米根霉脂肪酶ROL进行热稳定性改造，大幅度的提高了米根霉脂肪酶ROL的热稳定性，同时，借助计算机模拟技术，对热稳定性提高的原理进行了分子层面的解释。本发明提供的脂肪酶突变体的热稳定性显著提升，再结合其本身具备的高Sn-1,3选择性，使其更具工业化应用价值。
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公开(公告)号：CN105713069B
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201610139791.5
申请日：2016-03-11
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种溶杆菌素的纯化方法，包括以下步骤：(1)提供生产溶杆菌素的发酵液；(2)除去发酵液中的菌体；(3)以XAD1600树脂为填料，进行第一次吸附层析，以水为流动相，收集合并流穿液和洗脱液I；(4)以SP207树脂为填料，进行第二次吸附层析，以体积浓度大于5％的乙醇溶液为流动相，获得洗脱液II；(5)将洗脱液II浓缩、冻干。本发明纯化方法能够高效低成本地从枯草芽孢杆菌发酵液中纯化提取溶杆菌素，最终得率能够达到89％，并且所得溶杆菌素纯度达到99％，适用于产业化分离提取溶杆菌素。
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公开(公告)号：CN105018443A
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201510460244.2
申请日：2015-07-30
Applicant: 浙江大学
CPC classification number: C12N9/14 , C12Y303/0201
Abstract: 本发明公开一种环氧化物水解酶突变体及其制备方法，环氧化物水解酶突变体是将如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第8位、第26位、第83位、第90位和第122位的氨基酸进行单点突变或多点突变获得。制备方法：将编码环氧化物水解酶的基因克隆到质粒pET28a(+)中，构建重组质粒pET28a(+)-EH；采用滚环PCR扩增质粒pET28a(+)-EH，得到含有编码环氧化物水解酶突变体的基因序列的开环重组载体；将含有编码正确突变体的基因的PCR反应液转化感受态大肠杆菌DH5α，挑取正确复制子，并提取正确突变质粒；转化大肠杆菌BL21(DE3)，诱导表达。与野生型环氧化物水解酶相比，本发明环氧化物水解酶具有极高的温度稳定性和pH值适应范围，可以大大提高工业化生产中环氧化物水解酶的使用寿命。
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