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公开(公告)号：CN102392043A
公开(公告)日：2012-03-28
申请号：CN201110413360.0
申请日：2011-12-13
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提供了一种重组人白细胞介素32β的制备方法及表达重组hIL-32β的毕赤酵母工程菌。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工合成引物；2)从健康人外周血单个核细胞经反转录PCR得到hIL-32β的编码基因；3)构建含有hIL-32β编码基因的重组真核表达载体，融合于毕赤酵母表达调控元件获得重组毕赤酵母工程菌；4)培养重组毕赤酵母工程菌，于培养液添加甲醇诱导毕赤酵母工程菌表达重组hIL-32β；5)采用离子交换层析和分子筛层析从培养液上清纯化重组hIL-32β。本发明构建的重组毕赤酵母工程菌可进行高密度培养并且分泌型表达重组hIL-32β，适用于工业化制备重组人白细胞介素32β。
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公开(公告)号：CN102392042A
公开(公告)日：2012-03-28
申请号：CN201110413167.7
申请日：2011-12-13
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提供了一种重组刀额新对虾精氨酸激酶的制备方法及表达重组刀额新对虾精氨酸激酶的毕赤酵母工程菌。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工合成引物；2)从刀额新对虾肌肉匀浆经反转录PCR得到精氨酸激酶的编码基因；3)构建含有刀额新对虾精氨酸激酶编码基因的重组真核表达载体，融合于毕赤酵母表达调控元件获得重组毕赤酵母工程菌；4)培养重组毕赤酵母工程菌，于培养液添加甲醇诱导毕赤酵母工程菌表达刀额新对虾精氨酸激酶；5)采用离子交换层析和分子筛层析从培养液上清纯化重组刀额新对虾精氨酸激酶。本发明构建的重组毕赤酵母工程菌可进行高密度培养并且分泌型表达重组刀额新对虾精氨酸激酶，适用于工业化制备重组刀额新对虾精氨酸激酶。
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公开(公告)号：CN102154251A
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN201010602818.2
申请日：2010-12-24
申请人： 江南大学
摘要： 一种利用黑曲霉生产羧肽酶的方法，属于生物工程技术领域。本发明采用麸皮、豆饼粉和玉米粉等农副产品为发酵基料，通过适当改变培养基中碳源和氮源的比例，优化酶液提取时间，利用黑曲霉(Aspergillus niger)LW-1菌株固态发酵生产羧肽酶。本发明提供了实验室小试生产的固态发酵培养基配方和培养条件，成熟发酵曲料的羧肽酶活性达到3194.4U/g～5584.2U/g。本发明具有设备简单、投入少、见效快、生产成本低廉、对环境友好以及羧肽酶活性较高等特点，有利于羧肽酶的开发和利用，具有较高的经济和实用价值。
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公开(公告)号：CN102154240A
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN201010550873.1
申请日：2010-11-19
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N9/42
摘要： 一种利用宇佐美曲霉生产壳聚糖酶的方法，属于生物工程技术领域。本发明以麸皮、豆饼粉和菜籽饼粉等农副产品为发酵基料，并添加适量的无机氮源、壳聚糖、无机盐和表面活性剂等，利用宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株固态发酵生产壳聚糖酶。本发明提供了宇佐美曲霉E001菌株实验室小试生产壳聚糖酶的固态发酵培养基配方和培养条件，其成熟发酵曲料的壳聚糖酶活性达到1942～2461U/g干曲。本发明具有设备简单、投入少、见效快、生产成本低廉、对环境友好以及壳聚糖酶发酵酶活性较高等特点，有利于壳聚糖酶的开发和利用，具有较高的经济和实用价值。
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公开(公告)号：CN117683759B
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202311752427.2
申请日：2023-12-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体及产原儿茶酸的重组大肠杆菌，突变体ApAroZR363A的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过出发序列的第363位精氨酸突变为丙氨酸得到；本发明还基于该突变体构建了一株重组大肠杆菌，具体地：通过阻断碳流从3‑脱氢莽草酸流向下游莽草酸，敲除了大肠杆菌中3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE成功构建了一株高产3‑脱氢莽草酸的底盘菌株，并引入具有抵抗产物抑制的高活性3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体ApAroZR363A在底盘菌株中构建原儿茶酸生物合成路径，最终建立了一个高效生物合成原儿茶酸的大肠杆菌重组菌株。
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公开(公告)号：CN117802080A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311735618.8
申请日：2023-12-15
摘要： 本发明公开了C3‑差向异构酶突变体及在生产D‑阿洛酮糖中的应用，属于生物工程领域。本发明利用结晶的方法得到了C3‑差向异构酶KeDt3e的晶体并解析了其三维结构，并通过对关键区域的氨基酸突变，获得了具有高底物选择性、热稳定性及催化效率的酶突变体。以表达KeDt3e M5的重组菌株作为生物催化剂进行全细胞转化，在2.5L发酵罐下，转化2h，D‑阿洛酮糖产量可达167.7g/L。该生产过程简单、原料易得、杂质少，具有较好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN117683759A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311752427.2
申请日：2023-12-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体及产原儿茶酸的重组大肠杆菌，突变体ApAroZR363A的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过出发序列的第363位精氨酸突变为丙氨酸得到；本发明还基于该突变体构建了一株重组大肠杆菌，具体地：通过阻断碳流从3‑脱氢莽草酸流向下游莽草酸，敲除了大肠杆菌中3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE成功构建了一株高产3‑脱氢莽草酸的底盘菌株，并引入具有抵抗产物抑制的高活性3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体ApAroZR363A在底盘菌株中构建原儿茶酸生物合成路径，最终建立了一个高效生物合成原儿茶酸的大肠杆菌重组菌株。
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公开(公告)号：CN113025546B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202110292484.1
申请日：2021-03-18
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种多酶级联转化L‑酪氨酸生产酪醇的方法，属于生物工程技术领域。本发明所述的生产方法在将中间产物转化为酪醇的过程中利用一辅酶再生体系，通过将NADP+转化为NADPH，降低反应成本，提高整体转化效率。更进一步地，通过模块化组装和基因重复表达实现各酶的平衡表达，避免了中间产物的积累。并从反应的pH、温度对催化体系进行优化，可使得酪醇产量达到21.84g/L，转化率达到95.5％。从而大大降低了的底物成本和环境污染等问题，为酪醇的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111004787B
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202010009417.X
申请日：2020-01-06
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种链霉菌磷脂酶D突变体、改造方法及其应用，属于生物工程技术领域。本发明的改造方法通过PLD的蛋白质改造，设计最佳突变体，克服了之前野生型的酶由于不能催化大体积底物而导致催化活性的降低，并通过实验验证。最终得到最佳突变体Q357F/Y405A，其kcat/Km(1.25mM‑1s‑1)较野生型提高了58％，磷脂酰丝氨酸的转化率为50.8％，产量达到38.6g/L，用本发明的方法可以大大降低成本，加快了酶转化法生产磷酯酰丝氨酸的工业化进程。
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公开(公告)号：CN114231507A
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202111611347.6
申请日：2021-12-27
申请人： 无锡阿科力科技股份有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种胆分节杆菌胆碱氧化酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对来源于的胆分节杆菌的胆碱氧化酶进行改造，克服了之前野生型的酶底物特异性和区域选择性的局限，最终得到最佳突变体Q5(AcCOxS101A/H351V/V355T/F357R/T357Q)，其转化1,4‑环己烷二甲醇生成1,4‑环己烷二甲醛的摩尔转化率为野生型的6.8倍，有效的提高了胆碱氧化酶AcCOx的催化效率，为1,4‑环己烷二甲醛的工业化制备奠定了基础。
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