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发明公开
CN102392043A 毕赤酵母制备人白细胞介素32β的方法 无效 - 撤回

  • 专利标题： 毕赤酵母制备人白细胞介素32β的方法
  • 专利标题（英）： Method for preparing human interleukin 32beta (hIL-32beta) from Pichia pastoris
  • 申请号： CN201110413360.0
    申请日： 2011-12-13
  • 公开(公告)号： CN102392043A
    公开(公告)日： 2012-03-28
  • 发明人: 陈伟 , 郑海军 , 来丽丽 , 郁心 , 邬敏辰 , 吴静
  • 申请人： 江南大学
  • 申请人地址： 江苏省无锡市蠡湖大道1800号
  • 专利权人： 江南大学
  • 当前专利权人： 江南大学
  • 当前专利权人地址： 江苏省无锡市蠡湖大道1800号
  • 主分类号： C12N15/81
  • IPC分类号： C12N15/81 ;  C12N1/19 ;  C12P21/02 ;  C12R1/84
毕赤酵母制备人白细胞介素32β的方法
摘要：
本发明提供了一种重组人白细胞介素32β的制备方法及表达重组hIL-32β的毕赤酵母工程菌。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工合成引物；2)从健康人外周血单个核细胞经反转录PCR得到hIL-32β的编码基因；3)构建含有hIL-32β编码基因的重组真核表达载体，融合于毕赤酵母表达调控元件获得重组毕赤酵母工程菌；4)培养重组毕赤酵母工程菌，于培养液添加甲醇诱导毕赤酵母工程菌表达重组hIL-32β；5)采用离子交换层析和分子筛层析从培养液上清纯化重组hIL-32β。本发明构建的重组毕赤酵母工程菌可进行高密度培养并且分泌型表达重组hIL-32β，适用于工业化制备重组人白细胞介素32β。
摘要（英）：

The invention provides a preparation method of recombinant hIL-32beta and a Pichia pastoris engineering bacterium which expresses the recombinant hIL-32beta. The preparation method of the invention concretely comprises the following steps: 1, artificially synthesizing primers; 2, carrying out reverse transcriptional PCR on mononuclear cells of the peripheral blood of a healthy person to obtain hIL-32beta coding gene; 3, constructing a recombinant eukaryotic expression vector containing the hIL-32beta coding gene, fusing the hIL-32beta coding gene into a Pichia pastoris expression regulation element to obtain the recombinant Pichia pastoris engineering bacterium; 4, culturing the recombinant Pichia pastoris engineering bacterium, adding methanol to the nutrient solution to induce the Pichia pastoris engineering bacterium to express the recombinant hIL-32beta; and 5, purifying the recombinant hIL-32beta from the supernatant of the nutrient solution by ion exchange chromatography and molecular sieve chromatography. The recombinant Pichia pastoris engineering bacterium constructed in the invention, which can be cultured in a high density mode and express the recombinant hIL-32beta in a secreting mode, is suitable for the industrial preparation of the recombinant hIL-32beta.

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