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公开(公告)号：CN114214293B
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202111599580.7
申请日：2021-12-24
申请人： 无锡阿科力科技股份有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种恶臭假单胞菌细胞色素P450环氧酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对来源于恶臭假单胞菌的细胞色素P450环氧酶进行改造，克服了之前野生型的酶因为过氧化氢逸散和酸醇对质子转化率低而导致的催化效率低的局限，最终得到最佳突变体Q6(PpCytPA250V/T255E/S296V/A297P/P298N)，以此突变体为催化剂，以降冰片烯为底物，转化后10mL规模摇瓶产量为72.05g/L，摩尔产率为61.59％，单位菌体生产环氧降冰片烷的能力为3.6g/g，几乎不产生羟基化副产物。因此大大降低了之前的高菌体量以及繁复的后期分离纯化过程，为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114231507A
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202111611347.6
申请日：2021-12-27
申请人： 无锡阿科力科技股份有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种胆分节杆菌胆碱氧化酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对来源于的胆分节杆菌的胆碱氧化酶进行改造，克服了之前野生型的酶底物特异性和区域选择性的局限，最终得到最佳突变体Q5(AcCOxS101A/H351V/V355T/F357R/T357Q)，其转化1,4‑环己烷二甲醇生成1,4‑环己烷二甲醛的摩尔转化率为野生型的6.8倍，有效的提高了胆碱氧化酶AcCOx的催化效率，为1,4‑环己烷二甲醛的工业化制备奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114231507B
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202111611347.6
申请日：2021-12-27
申请人： 无锡阿科力科技股份有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种胆分节杆菌胆碱氧化酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对来源于的胆分节杆菌的胆碱氧化酶进行改造，克服了之前野生型的酶底物特异性和区域选择性的局限，最终得到最佳突变体Q5(AcCOxS101A/H351V/V355T/F357R/T357Q)，其转化1,4‑环己烷二甲醇生成1,4‑环己烷二甲醛的摩尔转化率为野生型的6.8倍，有效的提高了胆碱氧化酶AcCOx的催化效率，为1,4‑环己烷二甲醛的工业化制备奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114214293A
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202111599580.7
申请日：2021-12-24
申请人： 无锡阿科力科技股份有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种恶臭假单胞菌细胞色素P450环氧酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对来源于恶臭假单胞菌的细胞色素P450环氧酶进行改造，克服了之前野生型的酶因为过氧化氢逸散和酸醇对质子转化率低而导致的催化效率低的局限，最终得到最佳突变体Q6(PpCytPA250V/T255E/S296V/A297P/P298N)，以此突变体为催化剂，以降冰片烯为底物，转化后10mL规模摇瓶产量为72.05g/L，摩尔产率为61.59％，单位菌体生产环氧降冰片烷的能力为3.6g/g，几乎不产生羟基化副产物。因此大大降低了之前的高菌体量以及繁复的后期分离纯化过程，为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN118667893A
公开(公告)日：2024-09-20
申请号：CN202410818360.6
申请日：2024-06-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种利用CO2合成丙酮酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过路径设计，及热力学分析，获得了包含将CO2转化为甲醛的第一反应模块、将甲醛转化为二羟基丙酮的第二反应模块和将二羟基丙酮转化为丙酮酸的第三反应模块的丙酮酸合成路径。按照该合成路径通过一锅法催化18h后，从反应体系中检测到0.11g/L的丙酮酸。将该路径引入大肠杆菌构建获得的菌株TD‑F1胞内可检测到ADRP中间代谢物二羟基丙酮(m+3)、丙酮醛(m+3)和丙酮酸(m+3)，其相对丰度分别达到20.8％、18.4％和14.9％，成功实现了以CO2为底物合成丙酮酸。
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公开(公告)号：CN116904381B
公开(公告)日：2024-07-12
申请号：CN202310951198.0
申请日：2023-07-31
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一株产己二酸的重组大肠杆菌的构建及其应用，属于生物技术领域。本发明将大肠杆菌进行改造，敲除了3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE、负调控转录抑制因子tyrR、乙酸激酶基因ackA、丙酮酸脱氢酶基因poxB和奎尼酸脱氢酶基因YdiB，过表达了aroB、aroD、aroGFBR、ppsA、tktA、talA、GsQOR和gdh，并通过RBS序列调控己二酸生产的靶点基因片段烯酸还原酶编码基因GsQOR和葡萄糖脱氢酶编码基因gdh的表达强度，再过表达调控顺,顺‑粘康酸的靶点基因aroZ、aroY和catA，最后经发酵放大验证己二酸产量，在48h达5.3g/L。本发明为从顺,顺‑粘康酸生产己二酸提供了新方法，具有较好发展前景，有利于用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN116694591B
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202310775863.5
申请日：2023-06-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种1,3‑丙二醇脱氢酶突变体及产1,3‑丙二醇的克雷伯氏菌，属于生物技术领域。本发明以Klebsiella pneumoniae ATCC 13883为出发菌株，通过敲除编码α‑乙酰乳酸脱羧酶的budA基因，编码d‑乳酸脱氢酶LDH的ldhA基因，编码乙醛脱氢酶ALDH的aldA基因，PTS转运系统关键酶编码基因crr，过表达甘油脱水酶基因dhaB和苹果酸酶基因maeB、来自大肠杆菌的醛基还原酶基因yqhD和突变后的1,3‑丙二醇脱氢酶dhaT，获得了重组克雷伯氏菌KP‑FMME；利用此重组菌株进行5L发酵罐发酵，经发酵条件优化，重组克雷伯氏菌KP‑FMME以甘油为原料发酵48h，可生产130g/L的1,3‑丙二醇，具有十分广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN118028201A
公开(公告)日：2024-05-14
申请号：CN202410164562.3
申请日：2024-02-05
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种提高硫酸软骨素6‑O‑磺基转移酶可溶性表达及酶活的方法，属于生物工程技术领域。本发明首次实现了海洋生物来源的CHST15在原核宿主中异源表达，并通过与促溶标签共表达的策略提高了CHST15可溶性表达量，可使CHST15的胞内酶活提高了2.8倍，达到125.1U/mL。本发明还优化了重组菌的表达条件，将磺基转移酶可溶性表达量进一步提高至134.8U/mL。本方法只通过共表达的方式就实现了磺基转移酶酶活的大幅度提高，并且不影响酶的结构与后续纯化，为酶法生产硫酸软骨素E提供了有效方法。
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公开(公告)号：CN117965655A
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202410034625.3
申请日：2024-01-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种化学酶法环氧化降冰片烯合成环氧降冰片烷的方法，属于生物工程技术领域。本发明使用了一种具有过水解酶活性的酰基转移酶，并设计了一种合成环氧降冰片烷的新技术。本发明采用双相体系，以含有NBE的乙酸乙酯为有机相，以含有酰基转移酶PlAcT的缓冲液为水相，有机相与水相等比例混合反应进行催化反应。本发明提供的化学酶法环氧化降冰片烯生产环氧降冰片烷产量可达29.6g/L，摩尔转化率50.6％。该过程温和、高效，具有良好的工业前景。
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公开(公告)号：CN113957029B
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202111257582.8
申请日：2021-10-27
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种调控生物被膜杂合系统改善苹果酸生产性能的策略，属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段，利用生物被膜，结合苯酚功能化修饰CdS纳米材料，达到提高电子传输。通过引入靶向生物被膜杂合系统，构建得到含有CdS‑生物杂合系统的菌株，显著提高了CdS纳米材料与大肠杆菌的接触面积，提高了NADH浓度，进而改善苹果酸生产。在光照条件下，L‑苹果酸浓度和生产强度分别提高到9.84g/L和0.14g/L/h。5L发酵罐发酵生产该菌株，苹果酸产量达到45.93g/L，具有较好的工业应用前景。
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