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公开(公告)号：CN108486069B
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN201810570334.0
申请日：2018-06-05
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)低含量样品的病毒分离方法，还公开了用于猪流行性腹泻病毒富集和分离的免疫纳米磁珠，该免疫纳米磁珠具有磁性的Fe2O3核心和偶联有PEDV膜蛋白特异性单域抗体的表面。传统方法从多重感染和低PEDV含量样品中分离病毒，需要病毒纯化和长时间盲传，分离效率低，限制了PEDV的研究工作。本发明利用纳米磁珠和PEDV特异性单域抗体制备了免疫纳米磁珠，能够有效捕获和富集粪便、组织等多种样品中的PEDV。样品经处理后利用免疫纳米磁珠进行病毒捕获和富集，将结合病毒的免疫纳米磁珠直接接种到Vero细胞，即可实现对病毒分离。本发明制备的免疫纳米磁珠和PEDV分离方法，适用于临床复杂和低病毒含量样品中PEDV的快速、有效分离。
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公开(公告)号：CN110684824B
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN201911093383.0
申请日：2019-11-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/6804 , C12Q1/689 , C12Q1/04
Abstract: 本发明涉及一种用于检测布鲁氏菌抗原的免疫磁珠试剂盒，属于生物技术领域。所述试剂盒包括：免疫磁珠、qPCR反应混合液、检测布鲁氏菌的上游引物、下游引物和探针；所述免疫磁珠为鼠抗布鲁氏菌M5抗原单克隆IgG抗体与磁珠的偶联物。本发明所述试剂盒灵敏度高、稳定性好，快速有效，与传统分离方法相比，克服了布鲁氏菌病料检出率低以及直扩抗原检测过程中布鲁氏菌病原易降解，且病原DNA提取过程中使用的待检液体体积有限导致所提取的DNA无法达到qPCR检测的最低要求。
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公开(公告)号：CN109438573B
公开(公告)日：2020-11-10
申请号：CN201811341154.1
申请日：2015-12-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.8。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。
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公开(公告)号：CN109517060B
公开(公告)日：2020-10-27
申请号：CN201811341948.8
申请日：2015-12-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.3。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。
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公开(公告)号：CN106191304B
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201610537118.7
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种检测小反刍兽疫病毒抗原的免疫磁珠试剂盒及其用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV H蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106086239B
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201610536855.5
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6804
Abstract: 本发明公开了一种用于小反刍兽疫病毒抗原检测的免疫磁珠试剂盒及其用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV全病毒IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN109400702A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811341949.2
申请日：2015-12-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.7。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。
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公开(公告)号：CN108486069A
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201810570334.0
申请日：2018-06-05
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)低含量样品的病毒分离方法，还公开了用于猪流行性腹泻病毒富集和分离的免疫纳米磁珠，该免疫纳米磁珠具有磁性的Fe2O3核心和偶联有PEDV膜蛋白特异性单域抗体的表面。传统方法从多重感染和低PEDV含量样品中分离病毒，需要病毒纯化和长时间盲传，分离效率低，限制了PEDV的研究工作。本发明利用纳米磁珠和PEDV特异性单域抗体制备了免疫纳米磁珠，能够有效捕获和富集粪便、组织等多种样品中的PEDV。样品经处理后利用免疫纳米磁珠进行病毒捕获和富集，将结合病毒的免疫纳米磁珠直接接种到Vero细胞，即可实现对病毒分离。本发明制备的免疫纳米磁珠和PEDV分离方法，适用于临床复杂和低病毒含量样品中PEDV的快速、有效分离。
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公开(公告)号：CN106086240A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610536967.0
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于检测小反刍兽疫病毒抗原的免疫磁珠试剂盒及其用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV F蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN104086652A
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201410304607.9
申请日：2014-06-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗O型口蹄疫病毒特异性单域抗体及其重组表达载体，该抗O型口蹄疫病毒特异性单域抗体具有核苷酸序列：SEQIDNO1或SEQIDNO2。本发明以O型口蹄疫病毒灭活疫苗免疫双峰驼，利用噬菌体展示技术建立抗FMDVO型VHH免疫抗体库，以重组VP1蛋白作为筛选用抗原，通过3轮高强度淘洗，筛选得到与VP1抗原亲和力强的2株特异性抗FMDV血清O型的重链抗体序列，并将其分别克隆到原核表达载体中，在E.coli中完成了可溶性表达，亲和层析纯化的VHH抗体蛋白能够特异性的同O型FMDV全病毒抗原和重组VP1蛋白特异性相互作用，与FMD病毒Asia1和A型不发生交叉反应，具备了同常规IgG抗体相同的生物学功能。
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