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公开(公告)号：CN115057941A
公开(公告)日：2022-09-16
申请号：CN202210501097.9
申请日：2022-05-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K19/00 , C07K14/09 , C07K14/00 , C12N15/70 , A61K39/135 , A61K39/295 , A61P31/14 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种AO双价口蹄疫病毒表位嵌合纳米颗粒的制备方法及应用。本发明的AO双价口蹄疫病毒表位嵌合纳米颗粒由A型及O型口蹄疫病毒的表位串联两种骨架蛋白组成。本发明通过选择A型及O型口蹄疫病毒结构蛋白及非机构蛋白的T细胞表位及B细胞表位，串联至骨架蛋白A上，再选择具有免疫增强效果的多个肽段串联至骨架蛋白B上，之后将优化后的两个蛋白的基因序列插入到原核载体中，通过原核系统表达、纯化、自组装后得到所述的AO双价口蹄疫病毒表位嵌合纳米颗粒。本发明的AO双价口蹄疫病毒表位嵌合纳米颗粒可用于制备预防A型及O型口蹄疫病毒引起的疾病的疫苗。此外，本发明中的纳米颗粒骨架还可用于串联其他病毒的表位制备相关疫苗。
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公开(公告)号：CN115043914A
公开(公告)日：2022-09-13
申请号：CN202210613204.7
申请日：2022-05-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/085 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种塞内卡病毒A空衣壳及其制备方法和用途。本发明在细胞感染8h时加入10mM盐酸胍使SVA完整病毒粒子全部形成空衣壳，然后使用10％‑50％氯化铯，230000g，离心2.5h条件下分离SVA完整病毒粒子及空衣壳。为确定分离塞内卡病毒A完整病毒粒子和空衣壳的免疫效果，按2μg/鼠的剂量肌肉注射免疫BALB/c小鼠，之后检测特异性抗体和中和抗体变化。结果显示SVA完整病毒粒子及空衣壳免疫后诱导产生的中和抗体及特异性抗体相当。本发明的提出为塞内卡病毒A空衣壳的制备提供了新的技术手段，也为更为安全、有效的塞内卡病毒A疫苗的研究提供了技术支持，同时也为其他小RNA病毒的分离纯化奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114317571A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202111641645.X
申请日：2021-12-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/62 , C12N15/70 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61K39/39 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种病毒样颗粒及其制备方法和应用，属于农业科学畜牧兽医科学技术领域。本发明以小泛素样修饰蛋白作为标签蛋白促进病毒结构蛋白VP0、VP1和VP3的正确折叠，同时保证了蛋白的结构稳定性，实现结构蛋白的大量表达，经过3种结构蛋白体外自组装后，获得大量的与天然病毒性能相似的病毒样颗粒。经过免疫原性检测，本发明制备的病毒样颗粒具有较高的免疫原性，可作为储备疫苗，在防控猪水泡病或口蹄疫病毒传播中应用。
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公开(公告)号：CN107302911B
公开(公告)日：2021-12-14
申请号：CN201610259741.0
申请日：2016-04-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A01N1/02
Abstract: 本发明公开了一种用于牛羊食道‑咽部分泌物的保存液及其制备方法和用途，属于生物技术领域。本发明的一种用于牛羊食道‑咽部分泌物的保存液，其pH值为6.8—7.6的磷酸盐缓冲液，稳定剂以及防腐剂组成，其中，所述的磷酸盐缓冲液中还含有氯化钠及/或氯化钾，氯化钠及/或氯化钾的浓度为0.2‑10g/L，所述的稳定剂选自牛血清白蛋白，酪蛋白、马血清、甘油中的一种或多种，所述的防腐剂选自叠氮钠、盘尼西林、青霉素及氯霉素中的一种或多种。与现有技术相比，本发明采用上述原料制成保存液，无毒无刺激性气味，安全性高，保存效果好，能较长时间保存不会变质，不会影响后期O/P液检测效果。
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公开(公告)号：CN112176104A
公开(公告)日：2021-01-05
申请号：CN202011070808.9
申请日：2020-10-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒3型的可视化LAMP检测试剂盒，该试剂盒是包含有6条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。本发明的试剂盒以中性红为显色染料，使肉眼直观效果更加鲜明，阳性反应为粉红色，阴性反应为橘黄色，而且还实现了由试剂盒直接提供含有颜料的反应预混缓冲液的需求，这样不仅简化了操作程序，还有效避免污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，不仅能够以从临床样品中提取的DNA为扩增模板，而且还能够直接以全血或者血清为模板扩增，反应结果直接肉眼观察判断，具有良好的特异性和敏感性，需求设备简单(恒温热块即可)，操作便捷，不需要特殊技术人员，适于各种检测环境，尤其是现场使用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111793722A
公开(公告)日：2020-10-20
申请号：CN202010787407.9
申请日：2020-08-07
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及一步法检测2型猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组和试剂盒，属于病毒检测技术领域。本发明所述引物探针组，包括引物F1、引物F2、引物R和探针，所述引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述探针为在SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的5'端修饰有荧光基团、3'端修饰有猝灭基团的物质。应用本发明所述引物探针组进行检测具有良好的特异性和敏感性，与1型猪繁殖与呼吸综合征没有任何反应，具有很好的临床应用价值。
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公开(公告)号：CN111778221A
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN202010652309.4
申请日：2020-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N7/01 , C12N15/866 , C07K19/00 , A61K39/295 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14 , A61P31/20 , C12R1/93
Abstract: 本发明根据计算机软件模拟结果，在猪细小病毒PPV VP2蛋白表面Loop2区和Loop4区后分别嵌入SAT2 FMDV B细胞表位(VYTKAAAAIRGDRAALAAKYADTNHTLPPTFNFGYVTVDK)，在N端嵌一个T细胞表位(NVQEGRRKHTDVAFLLDRST)。根据昆虫细胞嗜性优化合成嵌合基因GS1925OP，克隆到载体pFastBacTMDual上，转化大肠杆菌DH10Bac，获得重组杆粒rBacmidNT1L2B4B，转染sf9细胞，收获重组杆状病毒rBacNT1L2B4B，用其感染HF细胞，使用间接免疫荧光IFA针对嵌合表位和VP2蛋白进行检测，具有特异性荧光。Western-blot针对B、T细胞表位和VP2蛋白进行检测，在70KDa出现一条特异性条带。透射电镜TEM观察，重组蛋白NT1L2B4B能够自我组装成病毒样颗粒。本发明可以应用在为南非2型口蹄疫制备储备疫苗，并能在此基础上达到同时预防南非2型口蹄疫和猪细小病的目的。
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公开(公告)号：CN111087452A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN201911309242.8
申请日：2019-12-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2b亚型Cap蛋白的原核可溶性表达方法，以PCV2毒株基因组为参考序列，在PCV2b的Cap蛋白编码基因上游偶联SUMO促溶表达标签编码基因，在SUMO的上游引入6个His标签编码基因，优化基因，重组至PUC57质粒，以重组质粒为模板，设计特异性引物，经PCR扩增后产物克隆入pMAL-C4x原核表达载体，构建重组质粒，转入大肠杆菌进行诱导、纯化。本发明成功构建了pMAL-MBP-HisSUMO-Cap重组表达载体，MBP-HisSUMO-Cap融合蛋白在BL21(DE3)中可实现可溶性表达，纯化后MBP-HisSUMO-Cap融合蛋白作为免疫原，能与PCV2b阳性猪血清、兔抗MBP-tag多克隆抗体和免疫小鼠抗血清均能发生特异性反应，表明其具有较好的免疫原性，为PCV2b诊断试剂盒的研发奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN108508210B
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201810149238.9
申请日：2018-02-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种PRRSV N蛋白的原核可溶性表达方法及间接ELISA抗体检测方法，PRRSV N蛋白的原核可溶性表达方法包括(1)根据大肠杆菌密码子偏嗜性特征，人工优化并合成PRRSV N蛋白编码基因；(2)以MBP作为促溶标签，构建N蛋白原核表达载体；(3)MBP融合N蛋白表达与纯化；再通过间接ELISA抗体检测方法进行特异性试验。本发明以带有MBP标签的PMAL‑C4X作为表达载体，实现了PRRSV N蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达，诱导培养在接近室温进行，无需加热或降温设备，目的蛋白洗脱采用10mmoL/L麦芽糖溶液，洗脱效果好，用量少，节约成本。本发明以融合N蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法特异性强；本发明建立间接ELISA抗体检测方法与IDEXX同类试剂盒的总符合率为90％左右。
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公开(公告)号：CN106435016B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201610760228.X
申请日：2016-08-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供一种快速显色一步法检测猪圆环病毒2型的LAMP试剂盒，该试剂盒包含有6条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。本发明的试剂盒在不延长原有1小时反应时间的条件下，实现了将荧光染料直接加入反应管的一步操作，不仅简化了操作程序，解决了含有钙黄素的预混染料对Bst DNA扩增酶的抑制而导致在反应管直接加入荧光染料不显色的根本问题，还有效避免了由于反应结束后二次开盖导致的释放产物形成气溶胶的污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，能够肉眼直接直观判断，具有良好的特异性、敏感性和稳定性。
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