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公开(公告)号：CN103757115B
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201410022452.X
申请日：2014-01-17
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种基于多重微滴PCR偶联荧光分光光度法的生物基因定性、定量、高通量检测方法。首先，设计特异性引物并对其选择性地进行不同荧光基团标记，随后应用上述荧光标记的特异性引物进行微滴PCR扩增，扩增产物经纯化后，用荧光分光光度计或酶标仪来测量纯化后的PCR产物中各个发射波长和荧光值含量，达到自动检测的目的，可同时进行定性、定量和高通量检测。本发明方法可实现对大量目标DNA分子同时进行高通量的扩增和定性、定量和高通量检测。
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公开(公告)号：CN103589715B
公开(公告)日：2015-10-28
申请号：CN201210295558.8
申请日：2012-08-17
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种猪AMY2基因的一个可用于溯源的SNP分子标记及其检测方法。所述的SNP分子标记是通过DNA池测序获得，共1060bp，其包含部分第五外显子，部分第七外显子和完整的第五内含子，第六外显子和第六内含子序列，且第104位碱基处有一个碱基突变104C→104T，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该SNP分子标记在商品猪培育中，可以广泛用于猪肉产品DNA溯源及其检测，特别是用于猪肉产品的安全性溯源。
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公开(公告)号：CN104164510A
公开(公告)日：2014-11-26
申请号：CN201410410218.4
申请日：2014-08-20
Applicant: 上海市农业科学院 , 上海科立特农产品检测技术服务有限公司
CPC classification number: Y02A50/451 , C12Q1/686 , C12Q2537/143 , C12Q2565/125
Abstract: 本发明公开了一种利用多重PCR技术对食源性致病菌进行高通量快速检测的方法，依据四种主要的食源性致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增多性李斯特菌以及大肠杆菌O157：H7的保守区序列设计出适用于进行多重PCR的引物，用多重PCR技术检测农产品中的主要食源性致病菌，该检测方法特异性好，与8种相似菌种无交叉反应，扩增出的条带清晰，灵敏度也较高，检出限均可以达到103copies/ml，而且快速、方便。本发明设计的引物与多重PCR体系可制成适于快速检测食源性致病菌的试剂盒，利用此试剂盒可以大大地缩短时间，提高检测的效率。
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公开(公告)号：CN103966333A
公开(公告)日：2014-08-06
申请号：CN201410215717.8
申请日：2014-05-20
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/686 , C12Q2537/143 , C12Q2563/159 , C12Q2565/125
Abstract: 本发明公开了一种多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法，建立了一种改进的微滴PCR高通量的扩增技术，对该技术在实验仪器、实验方法和试剂方面进行了改进，优化了实验步骤，减少了一些实验环节，对试验中需要的仪器进行了国产化，使该方法更容易进行，大大减少了人力、物力和财力的需求，使得微滴PCR技术可为一般实验技术人员掌握，可在国内大多数生物实验室开展。实验结果清晰可靠，本发明方法可实现对大量目标DNA分子同时进行高通量的扩增来达到高通量定性检测的目的。
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公开(公告)号：CN102382900B
公开(公告)日：2013-05-08
申请号：CN201010271159.9
申请日：2010-08-31
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：1)首先设计并合成特异性引物和探针；2)目的片段的获得：配制PCR反应体系，按照PCR反应程序进行反应得到目的片段；3)配制连接反应液；4)转化并提取质粒模板；5)定性PCR检测；6)定量PCR检测。本发明的检测方法简单、快速、灵敏度高、特性性强、重复性好，并且检测的定量极限和检测极限极低，灵敏度高，可准确定量检测出猪圆环病毒2型，达到预防和控制猪圆环病毒2型流行的作用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102477424A
公开(公告)日：2012-05-30
申请号：CN201010555545.0
申请日：2010-11-23
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明涉及一种猪SFTPC基因中一个可用于溯源的SNP分子标记及其检测方法。所述的SNP分子标记是通过DNA池(pool)测序获得，其序列如SEQ ID NO 1所示，在该SNP分子标记的第639位碱基处有一个碱基突变639A→639T，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。在包括11个猪品种或品系的试验群体中，分析该SNP分子标记在试验群体中等位基因的分布情况，发现该分子标记在不同的品种或品系中的等位基因频率接近，多态性丰富，品种或品系间等位基因频率分布差异小，并且杂合度都大于0.3，初步判定该SNP标记可用作猪肉产品DNA溯源。
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公开(公告)号：CN102251016A
公开(公告)日：2011-11-23
申请号：CN201110206246.0
申请日：2011-07-22
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/04
Abstract: 本发明公开了一种应用于转基因作物根际土壤微生态安全性评价的Biolog ECO微平板技术，包括以下步骤：1)收集不同生育期的转基因作物、非转基因亲本作物根际土壤样品；2)进行Biolog ECO实验；3)平均吸光度AWCD及多样性指数的计算；4)主成分PCA分析。本发明技术可用于评价转基因作物对根际土壤微生物群落功能的影响，并由此评价转基因作物对根际土壤微生态系统的潜在安全风险。
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公开(公告)号：CN101717821A
公开(公告)日：2010-06-02
申请号：CN200910200687.2
申请日：2009-12-24
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明公开了MMP3基因中一个用于猪肉产品DNA溯源的新SNP分子标记，它是通过在6个猪品种或品系的试验群体(共计190个体)中，分析其MMP3基因的SNP位点等位基因的分布情况，通过克隆测序、序列分析比较而获得。所述MMP3基因序列长573bp，其中包含完整的内含子2、内含子3和完整外显子2的序列，部分外显子1和部分外显子3的序列；其序列如SEQ ID NO 1所示，在其第182位碱基处有一个碱基突变182C-182T。通过在试验群体中等位基因的变异度分析，初步判定本发明的SNP分子标记可用于猪肉产品溯源。
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公开(公告)号：CN101717770A
公开(公告)日：2010-06-02
申请号：CN200910200681.5
申请日：2009-12-24
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明公开一种提取苏云金芽胞杆菌大质粒DNA的方法，包括以下步骤：1)菌体的培养与收集；2)原生体的制备；3)细胞的裂解和质粒的提取；4)质粒的纯化。应用该方法得到的质粒DNA可直接用来限制性内切酶消化、PCR扩增等多种分子生物学实验。本发明操作简便、安全、质量高，可同时适用于多种革兰氏阳性细菌质粒DNA的提取，因此具有广泛的适用性。
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公开(公告)号：CN101712953A
公开(公告)日：2010-05-26
申请号：CN200910200684.9
申请日：2009-12-24
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种用于评价动物肠道微生物群落多样性的DNA提取方法。在细胞裂解以前先对样品进行前处理，将胞外DNA及污染物进行去除，避免了纯化步骤存在污染物去除困难和DNA回收率低的问题。本发明提取过程不使用酚、氯仿，减少了对实验人员的身体健康伤害、所获DNA完整，分子片段大于10kb，产量高。所提取的肠道微生物DNA的OD260/OD230及OD260/OD280接近标准值，可直接应用于分子操作，以评价动物肠道微生物群落多样性。
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