公开(公告)号：CN102660546A

公开(公告)日：2012-09-12

申请号：CN201210180504.7

申请日：2012-06-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 刘湘涛 ,  田宏 ,  吴锦艳 ,  陈妍 ,  尚佑军 ,  尹双辉 ,  王光祥 ,  靳野 ,  张克山 ,  杨顺利 ,  魏衍全 ,  刘永杰

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/867 ,  C12N15/10

Abstract: 一种用于抑制口蹄疫病毒复制的RNAi及其制备方法，所述包含siRNA序列、shRNA慢病毒表达载体构建、复制缺陷型慢病毒的获得、慢病毒感染PK-15细胞（猪肾细胞）以及抑制口蹄疫病毒复制效果的验证方法，该序列具有明显抑制口蹄疫病毒在敏感细胞上复制的作用。本发明对口蹄疫病毒体内外复制进行RNA干扰的探索，构建靶向口蹄疫病毒基因组的特定保守基因区段的慢病毒载体介导的稳定整合的RNA干扰技术，有望构建靶向口蹄疫病毒的siRNA的转基因动物。为RNAi应用于口蹄疫病毒的基因功能研究以及口蹄疫的防治积累了必要的实验数据，为动物的抗病育种提供前期准备。

公开(公告)号：CN101418303A

公开(公告)日：2009-04-29

申请号：CN200810150304.0

申请日：2008-07-06

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 刘湘涛 ,  尹双辉 ,  孙世琪 ,  田宏 ,  尚佑军 ,  韩雪清 ,  刘艳红

IPC: C12N15/40 ,  C12N15/70 ,  C07K14/08 ,  A61K39/187 ,  A61P31/14

Abstract: 一种猪瘟重组亚单位疫苗的制备方法，包括下述步骤：A.利用逆转录－聚合酶链式反应方法克隆猪瘟疫苗株E2蛋白的编码基因；B.构建融合E2基因：C.构建重组表达载体rE2；D.rE2的诱导表达：E.rE2纯化。F.Western blotting方法检测rE2活性。本发明创造性地以双E2基因串联表达方式使E2抗原表位的数量增加一倍，显著提高了重组E2亚单位疫苗的免疫效果；为提高双E2蛋白表达效率，在第二个E2基因 5′端起始密码子(ATG)上游增加一个大肠杆菌RBS序列(5′－AAGGAG－3′)；同时在串联的E2基因之间增加氨基酸接头5′－GSA GSAAGS GEF－3′，使获得的E2蛋白能够完整展示其抗原表位。本发明的E2蛋白重组亚单位疫苗，免疫保护效果与猪瘟兔化弱毒疫苗相当。