谷糠源过氧化物酶抗肿瘤活性片段及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN108048418A

    公开(公告)日:2018-05-18

    申请号:CN201810027037.1

    申请日:2018-01-11

    申请人: 山西大学

    摘要: 本发明提供了一种谷糠源过氧化物酶抗肿瘤活性片段及其制备方法和应用。所述片段的制备方法:Trizol法提取谷子幼苗组织mRNA,以mRNA为模板,经酶催化,反转录成cDNA。根据谷子抗肿瘤活性蛋白FMBP质谱鉴定结果,在Genebank中获得该蛋白基因序列,根据其不同的功能区域分别截短筛选,确定Ca2+结合位点的基因序列为抗肿瘤效应结构域,以此设计特定引物,以谷子cDNA为模板,PCR法扩增FMBP‑C基因序列;在该序列上下游分别引入BamH I和HindⅢ酶切位点,与pMal‑s载体连接,构建pMal‑s‑FMBP‑C重组质粒,转入E.coli DH5α感受态细胞,筛选获得阳性转化子;经IPTG诱导表达目的蛋白,将其亲和纯化、脱盐和浓缩,MTT法检测其抗肿瘤和逆转肿瘤多药耐药的功能,结果表明该活性片段具有显著的抗肿瘤及逆转肿瘤多药耐药的活性。

    一种增加甲状腺过氧化物酶表达量的表达方法

    公开(公告)号:CN107841491A

    公开(公告)日:2018-03-27

    申请号:CN201711072129.3

    申请日:2017-11-03

    IPC分类号: C12N9/08 C12N15/866 C12N15/65

    摘要: 本发明公开了一种增加甲状腺过氧化物酶表达量的表达方法,是通过TC表达框对杆状病毒转移载体pFBDM-IG进行改造,通过提高细胞活率和延长蛋白表达时间来增加甲状腺过氧化物酶在杆状病毒表达系统中的表达量。本发明的有益效果为:本发明提供的表达方法,包含有:杆状病毒反式激活因子IE0/1,嵌合启动子HPP,杆状病毒极晚期启动子polh,内部核糖体进入位点IRES基因和GFP基因,其中GFP基因表达可以产生绿色荧光蛋白,用于在病毒转染和感染时的细胞荧光观察;方法为:TC表达框构建,转移载体pFBDM-TC-TPO-IG构建,Tn7位点转座,重组菌液感染Sf9细胞获得重组杆状病毒和甲状腺过氧化物酶表达量检测。本发明将甲状腺过氧化物酶表达量增加了约1.7倍,有效提高了甲状腺过氧化物酶的表达量。