一种草酸脱羧酶的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN106939315A

    公开(公告)日:2017-07-11

    申请号:CN201710015055.3

    申请日:2017-01-09

    IPC分类号: C12N15/60 C12N15/75 C12N9/88

    摘要: 本发明公开了一种草酸脱羧酶的制备方法,首先构建包含芽胞杆菌属的酸诱导启动子和分泌信号肽以及在其调控下配置的真菌来源的草酸脱羧酶基因的重组表达质粒载体,用该载体转化可以在pH≤4.5下正常生长的芽胞杆菌,制备草酸脱羧酶重组菌。将该重组菌在发酵培养基中培养补加酸后进行诱导,通过简单纯化回收产生的胞外草酸脱羧酶。本发明方法制备的胞外草酸脱羧酶用于诊断试剂原料,药物组合物、保健食品或特殊医学用途配方食品的原料。采用突变的酸诱导启动子替换重组表达载体中的原始酸诱导启动子,转化芽胞杆菌能获得更高的表达量。

    一种用于大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌的高效穿梭质粒

    公开(公告)号:CN106497960A

    公开(公告)日:2017-03-15

    申请号:CN201611038010.X

    申请日:2016-11-23

    IPC分类号: C12N15/74

    摘要: 本发明涉及一种用于大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌的高效穿梭质粒、制备方法及其应用,穿梭质粒的基因序列如SEQ ID NO.1所示,是在质粒pPM5的基础上进行改造的,先将鸭疫里默氏杆菌复制起始基因(pRA0726 ori)克隆到此质粒中,然后将转移位点(oriT)克隆到上述质粒中,使此穿梭质粒能够通过高效的结合转移导入鸭疫里默氏杆菌中,且能稳定的复制。为了方便基因片段插入穿梭质粒上且提高基因的表达量,将在穿梭质粒上克隆一段带有多个内切酶位点的高表达启动子序列(High EXP)。本发明所得穿梭质粒可以在鸭疫里默氏杆菌中稳定存在,用于基因敲除株的回补。质粒较小且具有多个多克隆位点,易于操作。结合转移效率非常高。

    一种增加甲状腺过氧化物酶表达量的表达方法

    公开(公告)号:CN107841491A

    公开(公告)日:2018-03-27

    申请号:CN201711072129.3

    申请日:2017-11-03

    IPC分类号: C12N9/08 C12N15/866 C12N15/65

    摘要: 本发明公开了一种增加甲状腺过氧化物酶表达量的表达方法,是通过TC表达框对杆状病毒转移载体pFBDM-IG进行改造,通过提高细胞活率和延长蛋白表达时间来增加甲状腺过氧化物酶在杆状病毒表达系统中的表达量。本发明的有益效果为:本发明提供的表达方法,包含有:杆状病毒反式激活因子IE0/1,嵌合启动子HPP,杆状病毒极晚期启动子polh,内部核糖体进入位点IRES基因和GFP基因,其中GFP基因表达可以产生绿色荧光蛋白,用于在病毒转染和感染时的细胞荧光观察;方法为:TC表达框构建,转移载体pFBDM-TC-TPO-IG构建,Tn7位点转座,重组菌液感染Sf9细胞获得重组杆状病毒和甲状腺过氧化物酶表达量检测。本发明将甲状腺过氧化物酶表达量增加了约1.7倍,有效提高了甲状腺过氧化物酶的表达量。