一种高产木聚糖酶酿酒酵母菌及应用

    公开(公告)号:CN108949602A

    公开(公告)日:2018-12-07

    申请号:CN201810954604.8

    申请日:2018-08-21

    CPC classification number: C12N9/248 C12N15/81 C12P19/00

    Abstract: 本发明涉及一种高产木聚糖酶酿酒酵母菌株S8‑H,通过将来源于黑曲霉CICC2462菌的木聚糖酶xynB基因构建表达盒,利用rDNA整合法构建得到8拷贝木聚糖酶基因菌株,木聚糖酶表达量325U/mL,通过转化pYES6‑PGK‑HAC1片段到该菌株得到过表达HAC1 8拷贝木聚糖酶酿酒酵母工程菌,木聚糖表达量达到381U/mL,过表达HAC1提高了与内质网蛋白折叠相关基因表达水平,同时本发明提供了一种酿酒酵母菌分泌表达多拷贝外源基因的模型,可利用该模型构建表达其他基因,本发明所提供的高产木聚糖酶酿酒酵母菌株可优势的应用于秸秆降解,饲料制造过程中。

    一种木聚糖酶表达、纯化方法

    公开(公告)号:CN108546696A

    公开(公告)日:2018-09-18

    申请号:CN201810233502.7

    申请日:2018-03-21

    CPC classification number: C12N9/248 C12N15/70

    Abstract: 本发明公开了一种木聚糖酶表达、纯化方法,包括以下步骤:S01,表达步骤:含有目的基因的大肠杆菌在基本培养基中生长,使目的蛋白大量表达;S02,纯化步骤:含有目的蛋白的融合蛋白通过两步镍亲和层析和酶切,得到高纯度木聚糖酶。本发明利用基本培养基表达木聚糖酶,只需提供大肠杆菌生长所需的基本营养物质以及微量元素,大幅度降低了表达成本。本发明用两次镍亲和层析柱纯化代替以前的离子交换和分子筛层析等纯化方式,可有效地缩短纯化时间(1天),并且采用本发明的木聚糖酶的纯化方法所得木聚糖酶得率高,纯度高,木聚糖酶的纯度大于96%。

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