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公开(公告)号：CN118086348A
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202410104051.2
申请日：2024-01-25
申请人： 黑龙江大学
摘要： 一种乳酸菌二腺苷酸环化酶基因敲除方法，属于基因工程技术领域。本发明涉及一种乳酸菌二腺苷酸环化酶基因敲除方法，通过融合PCR的方法构建含有氯霉素抗性基因及目的基因上下游同源臂的同源重组片段，并利用自杀质粒同源重组的技术将同源重组片段电转化到宿主基因组，在抗性基因及sacB蔗糖毒杀位点的作用下筛选单、双交换菌株以实现无痕敲除，获得乳酸菌二腺苷酸环化酶基因缺失菌株。本发明通过构建肠膜明串珠菌二腺苷酸环化酶基因缺失菌株，探明二腺苷酸环化酶在乳酸菌EPS生物合成过程中的作用，提高EPS产量。
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公开(公告)号：CN114717117A
公开(公告)日：2022-07-08
申请号：CN202210514077.5
申请日：2022-05-12
申请人： 黑龙江大学
IPC分类号： C12N1/12 , C12P7/649 , C12P7/6463 , C02F3/32 , C10L1/02 , C02F101/16 , C12R1/89
摘要： 本发明涉及产油微生物的生物技术领域，具体涉及一株耐铵产油单针藻及其应用。本发明具体公开一株单针藻(Monoraphidium sp.)W1‑1，其保藏编号为CCTCC M 2022481，该藻株能够在高浓度铵条件下保持较高的油脂产量，其生长未受到高铵条件的明显抑制。该藻株可在生物能源领域推广使用，尤其是利用高铵培养液生产生物柴油或油脂方面具有独特优势。
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公开(公告)号：CN113430185A
公开(公告)日：2021-09-24
申请号：CN202110861556.X
申请日：2021-07-29
申请人： 黑龙江大学
摘要： 一种乳酸菌葡聚糖蔗糖酶的分离纯化方法，涉及一种蛋白酶的分离纯化方法。乳酸菌葡聚糖蔗糖酶的分离纯化方法：一、将柠檬明串珠菌N21接种于MRS液体培养基；再将种子液接种于产酶液体培养基发酵；二、将发酵液离心，取上清液，得到葡聚糖蔗糖酶粗酶液；三、粗酶液中加入硫酸铵并连续搅拌，再将沉淀溶于去离子水中透析；四、用DEAE‑sepharose FF阴离子交换层析和Sepadex G75分子筛层析纯化浓缩，超滤浓缩，之后冷冻干燥，得到固态葡聚糖蔗糖酶。本发明葡聚糖蔗糖酶分子量为170kDa，体外最适反应温度为30℃、最适pH值为5.5。金属离子K+、Na+、Ca2+和Tween 80对本发明获得的乳酸菌葡聚糖蔗糖酶具有促进作用，Zn2+、Hg+、Cu2+和Fe3+对本发明获得的乳酸菌葡聚糖蔗糖酶有抑制作用。
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公开(公告)号：CN105647954A
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201610157906.3
申请日：2016-03-18
申请人： 黑龙江大学
CPC分类号： C12N9/0006 , C12P7/18
摘要： 高产2,3-丁二醇的产酸克雷伯氏基因工程菌株的构建方法及其发酵方法，涉及一种高产2,3-丁二醇的基因工程菌株的构建方法及其发酵方法。本发明是为了解决目前产酸克雷伯氏菌产2,3-丁二醇产量低、转化率低、生产强度低及纯度低的问题。构建方法：一、ldh基因同源左臂片段ldh-L和右臂片段ldh-R的构建；二、pldh-L和pldh-R质粒构建；三、pldh-LR质粒构建；四、pT-Cmr质粒构建；五、同源重组片段ldhL-Cmr-ldhR的构建；六、K.oxytoca HD79/pKD46菌株构建；七、ldhL-Cmr-ldhR转化K.oxytoca HD79/pKD46。发酵方法：一、将产酸克雷伯氏基因工程菌株接种到种子培养基中，培养至对数生长期，得种子液；二、将种子液接种到发酵培养基中，底物葡萄糖150g/L，发酵，结束。本发明用于生产2,3-丁二醇。
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公开(公告)号：CN104928763A
公开(公告)日：2015-09-23
申请号：CN201510271462.1
申请日：2015-05-26
申请人： 黑龙江大学
IPC分类号： D01C1/04
CPC分类号： D01C1/04
摘要： 一种亚麻脱胶液及其制备方法，它涉及一种植物纤维脱胶液及其制备方法。它解决了目前沤麻脱胶的方法中加入的微生物污染沤麻液、污染环境；以及加入纯酶制剂成本大幅上升、而且容易失活的问题。亚麻脱胶液由接种地衣芽胞杆菌HDYM-03的魔芋粉液体培养基发酵、离心取上清液制备而成。亚麻脱胶液按以下步骤制备：将地衣芽胞杆菌HDYM-03接种于魔芋粉液体培养基中，培养，然后离心，取上清液即得到亚麻脱胶液。亚麻脱胶液脱胶时间短、脱胶彻底、残胶率低，纤维素得率高、强度高。亚麻脱胶液的制备方法简单，成本低廉。
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公开(公告)号：CN104845972A
公开(公告)日：2015-08-19
申请号：CN201510259660.6
申请日：2015-05-20
申请人： 黑龙江大学
IPC分类号： C12N15/113
摘要： 副干酪乳杆菌HD1.7prcK基因siRNA，它涉及副干酪乳杆菌基因的siRNA分子。它解决构建自杀质粒难度大，同源臂的长短依赖目的基因的长短，不利于同源重组的发生等问题。siRNA-K1核苷酸序列为5'-GCAACGCUCCAACUUUCAUTT-3'。siRNA-K2核苷酸序列为5'-CCAACUUUCAUUGCAACAATT-3'。本发明的两种siRNA分子都能够高效的阻断副干酪乳杆菌HD1.7prcK基因的表达，从而降低副干酪乳杆菌HD1.7细菌素的产量。
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公开(公告)号：CN104694444A
公开(公告)日：2015-06-10
申请号：CN201510149247.4
申请日：2015-04-01
申请人： 黑龙江大学
摘要： 一株用于直投式酸菜发酵的干酪乳杆菌及其液体培养基，它涉及一株用于直投式酸菜发酵的微生物及其液体培养基。它解决了现有酸菜直投式发酵剂所选用的乳酸菌存在营养要求复杂、生长缓慢，种子液制备的成本高且周期长，多数乳酸菌产乳酸等有益代谢产物能力有限，与天然发酵酸菜营养成分无明显差异等问题。用于直投式酸菜发酵的干酪乳杆菌为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HDS-01，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2014648。用于直投式酸菜发酵的干酪乳杆菌的液体培养基由牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、磷酸氢二钾乙酸钠、硫酸镁、硫酸锰、吐温80和蒸馏水组成。
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公开(公告)号：CN102533861A
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201210012796.3
申请日：2012-01-16
申请人： 黑龙江大学
IPC分类号： C12N15/866 , C12N15/66
摘要： 具有CBA启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法，涉及一种具有CBA启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法。解决现有重组杆状病毒介导的基因表达效率低的问题。方法：依次构建pMD18-T-GV、pFastBac1-GV、pGM18-T-pHGV、pMD18-T-CBA、pFastBac[pH-]-pHBOX、pSD-CBA、pSD、pSD-L-ITR和pSD-ITRs；构建pMD18-T-EGFP；构建pSD-EGFP；构建pSD-ITRs-EGFP；转化DH10Bac细胞，获得重组载体；转染，获得重组杆状病毒。经过修饰改造的重组杆状病毒所介导的EGFP基因的表达效率明显增强。
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公开(公告)号：CN102174715A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN201010611429.6
申请日：2010-12-29
申请人： 黑龙江大学
摘要： 大麻加菌脱胶液重复利用进行大麻脱胶的方法，它涉及大麻脱胶的工艺方法。它主要解决了现有大麻脱胶的方法存在脱胶周期长、出麻率低、大麻纤维强度低、沤制中的污水排放量大的问题。方法：活化大麻脱胶用菌种；一级种子培养；二级种子培养；三级种子培养；进行大麻加菌脱胶；加菌脱胶液回收后加入到新的大麻脱胶池中，再加入大麻茎秆、氯化钠和尿素，再以清水注满大麻脱胶池，加温沤制大麻，到达沤制终点时即完成。本发明每天都减少50％的废水排放，节约大麻脱胶用能耗10％～15％；同时大麻茎秆的脱胶周期缩短为80～120h、大麻纤维出麻率提高了3％～5％、大麻纤维强度提高到220～280N，改善了大麻纤维质量。
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公开(公告)号：CN101302535B
公开(公告)日：2010-10-20
申请号：CN200810064831.X
申请日：2008-06-30
申请人： 黑龙江大学
摘要： 一种表达木酮糖激酶基因的质粒的构建方法，它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了目前经代谢工程改造后的酿酒酵母木糖利用率仍然很低，且发酵副产物木糖醇产生量高的问题。构建方法：先克隆KanR基因、XKS1基因、ADH1终止子片段、酿酒酵母中2.2kb rDNA片段；然后回收、纯化基因片段与pGEMT Easy载体连接；再依次构建质粒pR、质粒pRK和质粒pRKT；最后将2.2kb rDNA片段加入质粒pRKT。本发明方法所构建的载体可以将XKS1基因高拷贝整合到酿酒酵母的染色体基因组上，实现XKS1的超量稳定表达，疏通了酿酒酵母利用木糖产乙醇的木糖代谢流，提高了木糖的利用率，降低了副产物木糖醇的产量。
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