公开(公告)号：CN101302535A

公开(公告)日：2008-11-12

申请号：CN200810064831.X

申请日：2008-06-30

申请人： 黑龙江大学

发明人： 平文祥 ,  葛菁萍 ,  凌宏志 ,  宋刚 ,  杜春梅 ,  赵丹 ,  高冬妮 ,  曹喜生

IPC分类号： C12N15/66 ,  C12N15/54

摘要： 一种表达木酮糖激酶基因的质粒的构建方法，它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了目前经代谢工程改造后的酿酒酵母木糖利用率仍然很低，且发酵副产物木糖醇产生量高的问题。构建方法：先克隆KanR基因、XKS1基因、ADH1终止子片段、酿酒酵母中2.2kb rDNA片段；然后回收、纯化基因片段与pGEMT Easy载体连接；再依次构建质粒pR、质粒pRK和质粒pRKT；最后将2.2kb rDNA片段加入质粒pRKT。本发明方法所构建的载体可以将XKS1基因高拷贝整合到酿酒酵母的染色体基因组上，实现XKS1的超量稳定表达，疏通了酿酒酵母利用木糖产乙醇的木糖代谢流，提高了木糖的利用率，降低了副产物木糖醇的产量。

公开(公告)号：CN101302535B

公开(公告)日：2010-10-20

申请号：CN200810064831.X

申请日：2008-06-30

申请人： 黑龙江大学

发明人： 平文祥 ,  葛菁萍 ,  凌宏志 ,  宋刚 ,  杜春梅 ,  赵丹 ,  高冬妮 ,  曹喜生

IPC分类号： C12N15/66 ,  C12N15/54

摘要： 一种表达木酮糖激酶基因的质粒的构建方法，它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了目前经代谢工程改造后的酿酒酵母木糖利用率仍然很低，且发酵副产物木糖醇产生量高的问题。构建方法：先克隆KanR基因、XKS1基因、ADH1终止子片段、酿酒酵母中2.2kb rDNA片段；然后回收、纯化基因片段与pGEMT Easy载体连接；再依次构建质粒pR、质粒pRK和质粒pRKT；最后将2.2kb rDNA片段加入质粒pRKT。本发明方法所构建的载体可以将XKS1基因高拷贝整合到酿酒酵母的染色体基因组上，实现XKS1的超量稳定表达，疏通了酿酒酵母利用木糖产乙醇的木糖代谢流，提高了木糖的利用率，降低了副产物木糖醇的产量。