一种获得抗植物病原真菌活性物质的混菌发酵方法

    公开(公告)号:CN103882088A

    公开(公告)日:2014-06-25

    申请号:CN201410114055.5

    申请日:2014-03-25

    申请人: 黑龙江大学

    摘要: 一种获得抗植物病原真菌活性物质的混菌发酵方法,它涉及一种混菌发酵方法。本发明要解决现有技术中将两种具有拮抗作用的菌种在分别培养、分别发酵和分别施用的工艺繁琐及混合发酵液的抗菌活性低的问题。本发明的方法:一、将侧孢短芽孢杆菌BL-21和枯草芽孢杆菌HNDF2分别培养,得斜面菌种;二、将步骤一得到的斜面菌种经再培养,得一级种子液;三、将步骤二得到的一级种子液经再培养,得二级种子液;四、混菌发酵液的制备,即完成获得抗植物病原真菌活性物质的混菌发酵。本发明应用在微生物发酵领域。

    天然多组分抗菌蛋白发酵液的制备方法

    公开(公告)号:CN1928109B

    公开(公告)日:2010-05-26

    申请号:CN200610010429.4

    申请日:2006-08-23

    申请人: 黑龙江大学

    摘要: 天然多组分抗菌蛋白发酵液的制备方法,它涉及一种蛋白液的制备方法。它解决了目前农用抗生素对土传病害防效显著的种类极少,长期使用导致病原菌产生抗药性和现有抗菌蛋白制品毒性大、抗菌谱窄的问题。天然多组分抗菌蛋白发酵液按以下步骤制备:(一)将侧孢芽孢杆菌菌株BL-21接种到斜面活化培养基上培养;(二)将经过活化的侧孢芽孢杆菌菌株BL-21接种到液体种子培养基上培养;(三)将液体种子培养液与发酵培养基混合后培养,即得到天然多组分抗菌蛋白发酵液。本发明选用的菌株对环境和人体健康安全性高。本发明制备的天然多组分抗菌蛋白发酵液中含有多种抗菌蛋白,抑菌谱广,对多种植物病原真菌、部分革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌都有抑制作用。

    副干酪乳杆菌产生的抗菌肽的分离纯化方法

    公开(公告)号:CN101451158A

    公开(公告)日:2009-06-10

    申请号:CN200710144733.2

    申请日:2007-12-04

    申请人: 黑龙江大学

    摘要: 副干酪乳杆菌产生的抗菌肽的分离纯化方法。目前抗菌肽的应用已成为生命科学领域的一个研究热点。本发明包括:选取副干酪乳杆菌制作培养基,获得的发酵液在离心力10,000克,离心,冷藏并分离,经阳离子交换层析并过积累浓缩,使用超滤离心管在冷冻低温高速离心超滤除盐,同时收集流出液和保留液,将保留液通过分离纯化;高效液相色谱HPLC;采用蛋白浓缩试剂盒对样品进行浓缩,考马斯亮兰蛋白测定试剂盒检测蛋白浓度,12-烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE对分离到抗菌肽进行分子量估测,基质辅助激光解吸飞行时间质谱MOLDI-TOF-MS和串联质谱Q-TOF2实验测定氨基酸序列。本发明应用于抗菌肽的分离纯化。

    一种表达木糖醇脱氢酶基因的质粒的构建方法

    公开(公告)号:CN101302534A

    公开(公告)日:2008-11-12

    申请号:CN200810064830.5

    申请日:2008-06-30

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: C12N15/66 C12N15/53

    摘要: 一种表达木糖醇脱氢酶基因的质粒的构建方法,它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了目前酿酒酵母缺乏木糖醇脱氢酶(XDH),而不能使木糖代谢后产生乙醇问题。构建方法:一、克隆xyl2基因;二、回收、纯化xyl2基因片段后与pGMT vector载体连接,得到pGMT-xyl2;三、重组质粒p406ADH1-1的构建;四、重组质粒p406ADH1-2的构建;五、重组质粒p406ADH1-3的构建;六、将xyl2基因加入质粒p406ADH1-3,即得到表达木糖醇脱氢酶基因的质粒。本发明方法所构建的载体转化酿酒酵母后实现了木糖醇脱氢酶基因的高效稳定表达。

    健脑益智豆制品及其制作方法

    公开(公告)号:CN101077153B

    公开(公告)日:2011-10-12

    申请号:CN200610010075.3

    申请日:2006-05-23

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: A23L1/20 A23L1/36 A23L1/32

    摘要: 健脑益智豆制品及其制作方法,豆制品是人们日常生活中不可缺少的食品之一,但是现有的豆制品制作原料单一,营养结构不均衡,长期食用,容易导致人体碘元素和铁元素的流失的缺点,本发明健脑益智豆制品的研发则有效的克服了以上的问题,本发明由大豆、水、核桃仁、蛋黄或蛋黄粉、动物脑组成,黑龙江地域的天然非转基因大豆100g,核桃仁10g,猪脑20g,蛋黄8g,所述的水的重量份数为300-4000。本发明产品可制作成豆腐、干豆腐、豆腐脑、豆浆、豆奶等各种豆制品供人们长期食用。

    一种表达木酮糖激酶基因的质粒的构建方法

    公开(公告)号:CN101302535A

    公开(公告)日:2008-11-12

    申请号:CN200810064831.X

    申请日:2008-06-30

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: C12N15/66 C12N15/54

    摘要: 一种表达木酮糖激酶基因的质粒的构建方法,它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了目前经代谢工程改造后的酿酒酵母木糖利用率仍然很低,且发酵副产物木糖醇产生量高的问题。构建方法:先克隆KanR基因、XKS1基因、ADH1终止子片段、酿酒酵母中2.2kb rDNA片段;然后回收、纯化基因片段与pGEMT Easy载体连接;再依次构建质粒pR、质粒pRK和质粒pRKT;最后将2.2kb rDNA片段加入质粒pRKT。本发明方法所构建的载体可以将XKS1基因高拷贝整合到酿酒酵母的染色体基因组上,实现XKS1的超量稳定表达,疏通了酿酒酵母利用木糖产乙醇的木糖代谢流,提高了木糖的利用率,降低了副产物木糖醇的产量。

    一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂及其制备方法

    公开(公告)号:CN103875715A

    公开(公告)日:2014-06-25

    申请号:CN201410114051.7

    申请日:2014-03-25

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: A01N63/00 A01P3/00 A01P5/00

    摘要: 一种防治大豆土传病害的生物型种衣剂及其制备方法,它涉及一种生物型种衣剂及其制备方法。本发明要解决目前施用农药解决土传病害的方法有剧毒、不安全环保的问题。本发明的生物型种衣剂由发酵液、10g/L~50g/L的分散剂、9g/L~29g/L的载体和9g/L~19g/L的成膜剂制成;其中所述的发酵液由等体积的侧孢短芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液组成。方法:一、制备侧孢短芽孢杆菌发酵液;二、制备枯草芽孢杆菌发酵液;三、加入分散剂、载体和成膜剂,混匀即得。本发明的生物种衣剂不含有任何高毒剧毒成分,安全环保,用于防治大豆根腐病和大豆孢囊线虫病。本发明用于生物型种衣剂的制备。

    一种表达木糖还原酶基因的质粒的构建方法

    公开(公告)号:CN101302533A

    公开(公告)日:2008-11-12

    申请号:CN200810064829.2

    申请日:2008-06-30

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: C12N15/66 C12N15/53

    摘要: 一种表达木糖还原酶基因的质粒的构建方法,它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了酿酒酵母中缺少木糖还原酶,不具备木糖代谢能力,不能有效发酵植物纤维水解液的问题。构建方法:先克隆XYL1基因、ADHt基因序列和KanR基因;再回收、纯化步骤一至三制备的基因片段,分别与载体连接;然后构建质粒pADH、质粒pAK;再将XYL1基因引入质粒pAK,即得到表达木糖还原酶基因的质粒。本发明方法将木糖还原酶基因XYL1和乙醇脱氢酶的强启动子的终止子序列构建于同一个质粒载体上,在增添了木糖代谢为乙醇的途径外,还抑制了木糖代谢为木糖醇,能够介导酿酒酵母高效代谢木糖生产乙醇。

    明目保健豆制品及其制作方法

    公开(公告)号:CN101077150B

    公开(公告)日:2010-12-01

    申请号:CN200610010072.X

    申请日:2006-05-23

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: A23L1/20 A61K36/815 A61P27/02

    CPC分类号: Y02A40/948

    摘要: 明目保健豆制品及其制作方法,常见药物“明目羊肝片”、“护肝片”的主要成分就是羊肝,主要起明目、护肝的作用,但因其生产技术比较复杂,成本较高,所售的价格也相对较高,不能起到日常保健的目的。本发明以大豆、羊肝、决明子、胡萝卜、菊花和枸杞子为主要原料,具有明目护肝和缓解视力疲劳的功效,其组成包括:豆浆、羊肝、决明子、胡萝卜、菊花、枸杞子,所述的豆浆的重量份数为100、所述的羊肝的重量份数为3.0-5.0、所述的决明子的重量份数为1.0-2.2、所述的胡萝卜的重量份数为3.2-8.0、所述的菊花的重量份数为0.8-1.6、所述的枸杞子的重量份数为1.0-1.8。本发明产品适于学生、老人、电脑操作者长期食用。

    一种表达木酮糖激酶基因的质粒的构建方法

    公开(公告)号:CN101302535B

    公开(公告)日:2010-10-20

    申请号:CN200810064831.X

    申请日:2008-06-30

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: C12N15/66 C12N15/54

    摘要: 一种表达木酮糖激酶基因的质粒的构建方法,它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了目前经代谢工程改造后的酿酒酵母木糖利用率仍然很低,且发酵副产物木糖醇产生量高的问题。构建方法:先克隆KanR基因、XKS1基因、ADH1终止子片段、酿酒酵母中2.2kb rDNA片段;然后回收、纯化基因片段与pGEMT Easy载体连接;再依次构建质粒pR、质粒pRK和质粒pRKT;最后将2.2kb rDNA片段加入质粒pRKT。本发明方法所构建的载体可以将XKS1基因高拷贝整合到酿酒酵母的染色体基因组上,实现XKS1的超量稳定表达,疏通了酿酒酵母利用木糖产乙醇的木糖代谢流,提高了木糖的利用率,降低了副产物木糖醇的产量。