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公开(公告)号：CN112899208B
公开(公告)日：2022-10-18
申请号：CN202110177960.5
申请日：2021-02-08
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N9/10 , C12N9/88 , C12N9/90 , C12P7/02 , C12R1/19 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种提高重组菌西柏三烯一醇产量的方法，本发明通过系统调控西柏三烯一醇合成关键酶基因ggpps、cbts、dxs和idi的表达，在E.coli中实现植物来源的西柏三烯一醇的高产。进一步同时过量表达法尼基焦磷酸合成酶基因ispA及ggpps、cbts、dxs和idi基因，提高其西柏三烯一醇产量。基于发酵优化确定的最适葡萄糖与酵母粉添加方式及发酵周期，显著提高了西柏三烯一醇产量。本发明还提供了上述方法在制备含西柏三烯一醇的产品中的应用。采用本发明获得的西柏三烯一醇高产量菌株及方法可高效生产西柏三烯一醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN111826389B
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202010455589.X
申请日：2020-05-26
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/57 , C12N1/21 , C12N9/04 , C12N9/08 , C12N9/10 , C12N9/16 , C12N9/26 , C12N9/48 , C07K14/78 , C07K14/435 , C12P21/02 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法，通过同源重组的方法将包含1‑4个SD序列的基因片段整合至编码D‑丙氨酰‑D‑丙氨酸羧肽酶DacA的启动子与DacA编码基因之间。本发明通过整合不同的SD序列至大肠杆菌DacA基因的启动子与DacA编码基因之间，提高了D,D‑羧肽酶DacA的表达，从而提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平。
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公开(公告)号：CN112409464B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202011322536.7
申请日：2020-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌重组蛋白胞外生产水平的信号肽突变体及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对信号肽M1(MSDEQKKPE QIHRRDILKWGAMAGAAVA)的N端区域进行定向进化，筛选获得具有高效胞外分泌水平的信号肽突变体文库，通过该突变体文库构建获得系列重组蛋白胞外分泌水平显著提高的重组枯草芽孢杆菌菌株。将获得的正向信号肽突变体进行排列组合复合突变，获得具有高效重组蛋白表达分泌水平的信号肽复合突变体，利用其构建获得具有高效胞外蛋白胞外分泌水平的枯草杆菌杆菌突变株。本发明所筛选获得的信号肽突变体，对于重组蛋白在枯草芽孢杆菌中具有高效的胞外蛋白分泌水平，重组蛋白胞外分泌水平提高了15倍以上。本发明方法对信号肽改造及重组蛋白在宿主中的高效分泌与生产具有重要指导意义。
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公开(公告)号：CN112899208A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110177960.5
申请日：2021-02-08
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N9/10 , C12N9/88 , C12N9/90 , C12P7/02 , C12R1/19 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种提高重组菌西柏三烯一醇产量的方法，本发明通过系统调控西柏三烯一醇合成关键酶基因ggpps、cbts、dxs和idi的表达，在E.coli中实现植物来源的西柏三烯一醇的高产。进一步同时过量表达法尼基焦磷酸合成酶基因ispA及ggpps、cbts、dxs和idi基因，提高其西柏三烯一醇产量。基于发酵优化确定的最适葡萄糖与酵母粉添加方式及发酵周期，显著提高了西柏三烯一醇产量。本发明还提供了上述方法在制备含西柏三烯一醇的产品中的应用。采用本发明获得的西柏三烯一醇高产量菌株及方法可高效生产西柏三烯一醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN112410236B
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202011322518.9
申请日：2020-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种类大牻牛儿烯合成酶C突变体及构建方法与应用，属于生物催化技术领域。本发明采用重组DNA技术将类大牻牛儿烯合成酶C编码基因，将其克隆至表达载体，并转化宿主，获得一株高产类大牻牛儿烯合成酶C的重组菌株。针对类大牻牛儿烯合成酶C活性位点E474周围loop结构上的氨基酸残基进行定向进化，筛选获得高活性类大牻牛儿烯合成酶C突变体。本发明还提供了上述方法在制备含西柏三烯醇的产品中的应用。采用本发明获得的高活性类大牻牛儿烯合成酶C突变体及方法可高效催化生产西柏三烯醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113416662B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202110621208.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产西柏三烯一醇的酿酒酵母及应用，属于代谢工程和微生物工程领域。本发明通过将关键酶西柏三烯醇合成酶基因、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)合酶基因、法尼基焦磷酸合成酶(ERG20)基因整合至酿酒酵母菌株基因组上，并利用启动子Phxt1替换角鲨烯合成酶(ERG9)原来的启动子来敲低竞争途径麦角固醇途径，还将含有关键酶基因ggpp基因和cbts基因的游离质粒转入该酿酒酵母中，进一步提高了西柏三烯一醇产量。本发明还采用线粒体区室化方法，将GGPP合酶和西柏三烯醇合成酶定位到线粒体中，使西柏三烯一醇产量提高至283.98μg/L，在5L发酵罐发酵水平，西柏三烯一醇产量可达15mg/L。
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公开(公告)号：CN112852699A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110170739.7
申请日：2021-02-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种生产西柏三烯一醇的重组菌及其应用，本发明通过异源表达GGPP合酶基因ggpps和西柏三烯醇合酶基因cbts，构建了可生产植物来源的西柏三烯一醇的重组菌株。通过过表达DXP途径中碳代谢通量的关键基因1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸合成酶基因dxs和异戊二烯焦磷酸异构酶基因idi提高西柏三烯一醇产量。进一步优化表达质粒过量表达dxs和idi，西柏三烯一醇产量提高至对照的2.60倍。采用本发明获得的西柏三烯一醇高产量菌株及方法可高效生产西柏三烯一醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN112410236A
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN202011322518.9
申请日：2020-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种类大牻牛儿烯合成酶C突变体及构建方法与应用，属于生物催化技术领域。本发明采用重组DNA技术将类大牻牛儿烯合成酶C编码基因，将其克隆至表达载体，并转化宿主，获得一株高产类大牻牛儿烯合成酶C的重组菌株。针对类大牻牛儿烯合成酶C活性位点E474周围loop结构上的氨基酸残基进行定向进化，筛选获得高活性类大牻牛儿烯合成酶C突变体。本发明还提供了上述方法在制备含西柏三烯醇的产品中的应用。采用本发明获得的高活性类大牻牛儿烯合成酶C突变体及方法可高效催化生产西柏三烯醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN111826389A
公开(公告)日：2020-10-27
申请号：CN202010455589.X
申请日：2020-05-26
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/57 , C12N1/21 , C12N9/04 , C12N9/08 , C12N9/10 , C12N9/16 , C12N9/26 , C12N9/48 , C07K14/78 , C07K14/435 , C12P21/02 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法，通过同源重组的方法将包含1-4个SD序列的基因片段整合至编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子与DacA编码基因之间。本发明通过整合不同的SD序列至大肠杆菌DacA基因的启动子与DacA编码基因之间，提高了D,D-羧肽酶DacA的表达，从而提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平。
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公开(公告)号：CN113416662A
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN202110621208.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产西柏三烯一醇的酿酒酵母及应用，属于代谢工程和微生物工程领域。本发明通过将关键酶西柏三烯醇合成酶基因、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)合酶基因、法尼基焦磷酸合成酶(ERG20)基因整合至酿酒酵母菌株基因组上，并利用启动子Phxt1替换角鲨烯合成酶(ERG9)原来的启动子来敲低竞争途径麦角固醇途径，还将含有关键酶基因ggpp基因和cbts基因的游离质粒转入该酿酒酵母中，进一步提高了西柏三烯一醇产量。本发明还采用线粒体区室化方法，将GGPP合酶和西柏三烯醇合成酶定位到线粒体中，使西柏三烯一醇产量提高至283.98μg/L，在5L发酵罐发酵水平，西柏三烯一醇产量可达15mg/L。
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