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公开(公告)号：CN104371994A
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410550898.X
申请日：2014-10-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明阐述了一种新型结合诱变与高通量筛选高产重组酶菌株的方法，属于基因工程、酶学及发酵技术领域。采用ARTP诱变技术对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB600宿主进行诱变，利用筛选平板初筛、96孔板高通量复筛、摇瓶发酵筛选验证的方式获得一株高产重组酶的突变株。以碱性淀粉酶为筛选模式酶，高通量筛选出产酶酶活力较高的突变株B.subtilis WB600-mutl2，发酵得酶活力为186.4U/mL，为出发株酶活的130.3％。过氧化氢酶在B.subtilis WB600-mut12中异源表达后，酶活力提高至出发宿主酶活的135.0％。该发明具有重要的实用与经济价值。
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公开(公告)号：CN112409464A
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN202011322536.7
申请日：2020-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌重组蛋白胞外生产水平的信号肽突变体及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对信号肽M1(MSDEQKKPE QIHRRDILKWGAMAGAAVA)的N端区域进行定向进化，筛选获得具有高效胞外分泌水平的信号肽突变体文库，通过该突变体文库构建获得系列重组蛋白胞外分泌水平显著提高的重组枯草芽孢杆菌菌株。将获得的正向信号肽突变体进行排列组合复合突变，获得具有高效重组蛋白表达分泌水平的信号肽复合突变体，利用其构建获得具有高效胞外蛋白胞外分泌水平的枯草杆菌杆菌突变株。本发明所筛选获得的信号肽突变体，对于重组蛋白在枯草芽孢杆菌中具有高效的胞外蛋白分泌水平，重组蛋白胞外分泌水平提高了15倍以上。本发明方法对信号肽改造及重组蛋白在宿主中的高效分泌与生产具有重要指导意义。
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公开(公告)号：CN104862299A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510200528.8
申请日：2015-04-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种提高枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)外源蛋白表达量的方法。采用ARTP直接诱变含重组质粒的B.subtilis，经淀粉-台盼蓝平板预筛、96孔板高通量筛选及摇瓶发酵验证，获得一酶活力高的突变株，其酶活力提高了31.4％。本发明所用的ARTP技术是一种应用范围很广的生物诱变技术；在诱变时采用含有重组质粒的B.subtilis菌株直接诱变，省去了诱变后重组质粒的转化步骤，具有高效性；同时，结合96孔板进行高通量筛选，大大提高了筛选正突变株的效率。因此，通过该方法快速筛选外源蛋白高产B.subtilis菌株具有重要经济价值。
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公开(公告)号：CN112409464B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202011322536.7
申请日：2020-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌重组蛋白胞外生产水平的信号肽突变体及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对信号肽M1(MSDEQKKPE QIHRRDILKWGAMAGAAVA)的N端区域进行定向进化，筛选获得具有高效胞外分泌水平的信号肽突变体文库，通过该突变体文库构建获得系列重组蛋白胞外分泌水平显著提高的重组枯草芽孢杆菌菌株。将获得的正向信号肽突变体进行排列组合复合突变，获得具有高效重组蛋白表达分泌水平的信号肽复合突变体，利用其构建获得具有高效胞外蛋白胞外分泌水平的枯草杆菌杆菌突变株。本发明所筛选获得的信号肽突变体，对于重组蛋白在枯草芽孢杆菌中具有高效的胞外蛋白分泌水平，重组蛋白胞外分泌水平提高了15倍以上。本发明方法对信号肽改造及重组蛋白在宿主中的高效分泌与生产具有重要指导意义。
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