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公开(公告)号：CN116656581A
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202210148790.2
申请日：2022-02-17
摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌及其构建方法和应用，所述重组大肠杆菌可用于L‑苯丙氨酸的生产。本发明利用多轮诱变筛选对L‑苯丙氨酸结构类似物具有高抗性，且具有酪氨酸营养缺陷型突变菌株，并以温敏型重组质粒形式调控L‑苯丙氨酸合成途径中编码3‑脱氧‑7‑磷酸庚酸合酶和分支酸变位酶基因表达。本发明构建的重组大肠杆菌，在5 L发酵罐中，根据菌体生长阶段采取不同控温和补料方式，发酵时间为56 h条件下，L‑苯丙氨酸产量在62 g/L，糖酸转化率为25.2%，具有工业化应用前景和价值。
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公开(公告)号：CN118853718A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202410837453.3
申请日：2024-06-26
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种用于检测磷酸吡哆醛浓度的可视化生物传感器，属于生物化工技术领域。本发明以PylcH为响应原件，通过优化RBS的方式提高响应灵敏度以及响应范围，将优化后响应灵敏度高的传感器元件构建到pBAD质粒上，得到了在阿拉伯糖诱导下响应磷酸吡哆醛的生物传感器，该传感器可以通过荧光强度反映菌体发酵过程中磷酸吡哆醛浓度，其检测范围广且灵敏度高，在监测胞内辅因子浓度领域具有十分广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN117683759B
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202311752427.2
申请日：2023-12-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体及产原儿茶酸的重组大肠杆菌，突变体ApAroZR363A的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过出发序列的第363位精氨酸突变为丙氨酸得到；本发明还基于该突变体构建了一株重组大肠杆菌，具体地：通过阻断碳流从3‑脱氢莽草酸流向下游莽草酸，敲除了大肠杆菌中3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE成功构建了一株高产3‑脱氢莽草酸的底盘菌株，并引入具有抵抗产物抑制的高活性3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体ApAroZR363A在底盘菌株中构建原儿茶酸生物合成路径，最终建立了一个高效生物合成原儿茶酸的大肠杆菌重组菌株。
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公开(公告)号：CN117802080A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311735618.8
申请日：2023-12-15
摘要： 本发明公开了C3‑差向异构酶突变体及在生产D‑阿洛酮糖中的应用，属于生物工程领域。本发明利用结晶的方法得到了C3‑差向异构酶KeDt3e的晶体并解析了其三维结构，并通过对关键区域的氨基酸突变，获得了具有高底物选择性、热稳定性及催化效率的酶突变体。以表达KeDt3e M5的重组菌株作为生物催化剂进行全细胞转化，在2.5L发酵罐下，转化2h，D‑阿洛酮糖产量可达167.7g/L。该生产过程简单、原料易得、杂质少，具有较好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN117683759A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311752427.2
申请日：2023-12-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体及产原儿茶酸的重组大肠杆菌，突变体ApAroZR363A的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过出发序列的第363位精氨酸突变为丙氨酸得到；本发明还基于该突变体构建了一株重组大肠杆菌，具体地：通过阻断碳流从3‑脱氢莽草酸流向下游莽草酸，敲除了大肠杆菌中3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE成功构建了一株高产3‑脱氢莽草酸的底盘菌株，并引入具有抵抗产物抑制的高活性3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体ApAroZR363A在底盘菌株中构建原儿茶酸生物合成路径，最终建立了一个高效生物合成原儿茶酸的大肠杆菌重组菌株。
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公开(公告)号：CN114214293B
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202111599580.7
申请日：2021-12-24
申请人： 无锡阿科力科技股份有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种恶臭假单胞菌细胞色素P450环氧酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对来源于恶臭假单胞菌的细胞色素P450环氧酶进行改造，克服了之前野生型的酶因为过氧化氢逸散和酸醇对质子转化率低而导致的催化效率低的局限，最终得到最佳突变体Q6(PpCytPA250V/T255E/S296V/A297P/P298N)，以此突变体为催化剂，以降冰片烯为底物，转化后10mL规模摇瓶产量为72.05g/L，摩尔产率为61.59％，单位菌体生产环氧降冰片烷的能力为3.6g/g，几乎不产生羟基化副产物。因此大大降低了之前的高菌体量以及繁复的后期分离纯化过程，为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113929787B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202111255656.4
申请日：2021-10-27
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种调控生物被膜改善莽草酸生产性能的策略，属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段，利用生物被膜自组装系统，将异源目的蛋白固定在细胞生物被膜上来改善接触面积，提高目的蛋白的表达，有效提高底物淀粉的利用效率，使得发酵体系中莽草酸浓度提高。该方法设计简单，系统元件少，菌株生长负荷低，对菌株的生长情况和存活率没有显著影响。利用本发明构建的莽草酸生产菌株为发酵菌株，以淀粉为底物进行发酵生产，莽草酸产量和生产强度分别提高到47.5g/L和0.66g/L/h，具有较好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN113025533B
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202110424879.2
申请日：2021-04-20
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一株产丁酸的芽孢杆菌菌株筛选及其应用，属于生物工程技术领域。本发明的巨大芽孢杆菌FMME ZK001具有较好的传代稳定性；在摇瓶水平上发酵生产丁酸产量达10.4g/L，本发明的发酵生产丁酸的方法工艺操作简单易行、培养基成本低廉，适用于工业化生产。丁酸作为一种重要的短链脂肪酸，由于具有替代抗生素，增强动物机体免疫力，维护胃肠道内有益微生物菌群，促进动物消化能力等特点，对饲料发酵具有重要影响。该菌株可以用于饲料发酵产生丁酸，具有较强的产丁酸能力。
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公开(公告)号：CN112280725B
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202011185169.0
申请日：2020-10-29
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种高效生产琥珀酸的重组大肠杆菌及其构建方法。本发明敲除E.coli FMME‑N‑2产琥珀酸菌株的副产物编码基因得到菌株E.coli FMME‑N‑5（ΔfocA‑pflB‑ΔldhA‑Δpta‑ackA）；过表达来自产琥珀酸放线杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶pck和施式芽孢杆菌亚磷酸酯脱氢酶ptxD，筛选获得高效生产琥珀酸的工程菌；此工程菌株在7.5L发酵罐上采用两阶段发酵策略，发酵96 h，琥珀酸产量达到了137 g/L,琥珀酸得率达到1 g/g葡萄糖、生产强度为1.43 g/L/h，副产物乳酸、甲酸不积累，乙酸1‑2 g/L，具有一定的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN114107154A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111425348.1
申请日：2021-11-26
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种生产莽草酸的重组菌，表达调控细胞不对称分裂的靶点基因和调控莽草酸生产的靶点基因；调控细胞不对称分裂的靶点基因包括编码细胞骨架蛋白PopZ的基因popZ，调控莽草酸生产的靶点基因包括编码DAHP合成酶的基因aroG，编码3‑脱氢奎宁酸合酶的基因aroB和编码转酮醇酶的基因tktA。本发明的重组菌实现了从头合成莽草酸，底物为葡萄糖，价格低廉，且该菌株在7.5L发酵罐发酵后，莽草酸最高产量为88.1g/L，得率为0.33g/g，生产强度为1.1g/L/h。
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