桑螟β-呋喃果糖苷酶、编码基因、基因载体、菌株及应用

    公开(公告)号:CN103773748B

    公开(公告)日:2016-05-11

    申请号:CN201410031951.5

    申请日:2014-01-23

    Abstract: 本发明公开了一种来自桑螟的β-呋喃果糖苷酶、编码基因、基因载体、菌株及应用。本发明提供的桑螟β-FFase是序列表中SEQ ID NO.1所示的由488个氨基酸残基组成的蛋白质。本发明从桑树重要害虫桑螟的中肠转录产物中克隆得到DpSuc1a,该基因在桑螟的中肠高量表达,与表达载体pET-24b连接,转化到BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达,获得了可溶性融合蛋白DpSUC1a,经酶学特性鉴定,重组DpSUC1a具有β-FFase的活性,说明β-FFase是桑螟为害桑树,避免桑树生物碱毒害作用的重要酶蛋白。本发明的基因及其编码蛋白对食桑害虫抵抗桑树生物碱的分子机制研究,以及进一步利用植物转基因RNAi等技术开发新型抗虫靶标具有重要的理论及实际意义,将在桑园害虫防治和增强桑树抗虫性的研究中发挥重要的作用,应用前景广阔。

    一种拟南芥Mo敏感变异株筛选培养基及筛选方法

    公开(公告)号:CN104145811B

    公开(公告)日:2016-04-20

    申请号:CN201410406815.X

    申请日:2014-08-18

    Abstract: 一种拟南芥Mo敏感变异株的筛选方法以及筛选所用的培养基和培养方法。此方法筛选出拟南芥Mo敏感的突变体。筛选所用的培养基包括不含钼(-Mo)和含170nM钼(+Mo)的固体培养基。培养方法是:拟南芥M2种子先用75%的酒精浸泡30s,然后在1%次氯酸钠中浸泡10min,最后用无菌去离子水冲洗5-6次,消毒后的种子接种于-Mo或+Mo培养基上,经过4℃春化2天后,置于22℃、16h/8h光暗交替的光照培养箱中垂直培养。筛选方法是:以EMS诱变处理野生型拟南芥Col-0获得的M2代种子为试验材料,通过在-Mo和+Mo的培养基上进行反复筛选培养,根据拟南芥根系在两种培养基上的生长差异筛选出在-Mo培养基上根生长不好而在+Mo培养基上根生长很好的拟南芥Mo敏感变异株,并对其表型进行了分析。

    一种用于Gateway克隆系统的表达载体

    公开(公告)号:CN104250653A

    公开(公告)日:2014-12-31

    申请号:CN201410098146.4

    申请日:2014-03-17

    Abstract: 本发明公开了一种用于Gateway克隆系统的表达载体,通过将双HA标签序列片段与具有Gateway阅读框B片段的载体pART27-35Sa-GWB连接得到并在大肠杆菌中转化表达。本发明构建方法所得表达载体可以用于克隆的目的基因或其他来源的目的DNA片段的功能分析和蛋白表达,其方法具有快速、灵活、高效、省时、省力等优点,在基因功能研究方面有重要意义。

    一种从蚕体中提取纯化高纯度墨蝶呤的方法

    公开(公告)号:CN102516246A

    公开(公告)日:2012-06-27

    申请号:CN201110387345.3

    申请日:2011-11-30

    Abstract: 本发明涉及一种高纯度墨蝶呤的提取纯化方法,该方法为将黄体色家蚕体壁用50%的乙醇按料液比1:20制成匀浆,煮沸10min,15000rpm,4℃离心30min,取上清液,过滤,滤液浓缩至一定体积后经ECTEOLA纤维素柱分离,先用纯水洗脱,待色素完全分离开间距超过5cm再用0.01M乙酸洗脱,将含目的色素条带的洗脱液浓缩至干后溶于适量纯水,经SephadexG-25-150柱纯化,纯水洗脱,洗脱液浓缩至干后溶于适量纯水,经磷酸纤维素柱进一步纯化,纯水洗脱,再将洗脱液浓缩至干,即得高纯度墨蝶呤。本发明工艺成熟,具有成本低廉、工序简单、产量大,所提取的墨蝶呤纯度高,等明显优势,适合大规模工业化生产高纯度墨蝶呤。

    一种快速鉴定烟草抗性基因的有效方法

    公开(公告)号:CN103409500B

    公开(公告)日:2017-01-11

    申请号:CN201310173307.7

    申请日:2013-05-10

    Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定烟草抗性基因的有效方法,本发明所用的农杆菌株系为GV3101(pMP90),属根癌农杆菌,在烟草的遗传转化中效果比较好。采用的转化方法是电击转化法,而不是常用的冻融法或热激法,使用伯乐公司的电转化仪,其转化参数为0.1cm电击杯、输出25mF、电压1.8kV和抗性200W,提高了转化效率;本发明所用的培养基是最常用的LB培养基,而不是较复杂的YEP或YEB培养基,且所加抗生素分别为25mg/mL卡那霉素和50mg/mL利福平,可以有效的杀死没有转化成功的农杆菌,节省了筛选时间。

    一种从蚕体提取的墨蝶呤的鉴定方法

    公开(公告)号:CN102650621B

    公开(公告)日:2014-06-25

    申请号:CN201210133303.1

    申请日:2012-05-02

    Abstract: 本发明公开了一种从蚕体中提取的墨蝶呤的鉴定方法,该方法利用高效液相色谱法,色谱条件为以ODSC18为色谱柱,以甲醇-0.006%乙酸混合液为流动相,流速为1ml/min,柱温为25℃,进样量20ul,检测波长为420nm。按照该色谱条件对所提取的色素进行分析,能够有效地鉴定出目标产物墨蝶呤。本发明具有精密度高、简便、准确、重复性好、稳定性好等优势,为从蚕体提取墨蝶呤的鉴定提供了一种简便、高效,精准的方法。

    桑螟β-呋喃果糖苷酶、编码基因、基因载体、菌株及应用

    公开(公告)号:CN103773748A

    公开(公告)日:2014-05-07

    申请号:CN201410031951.5

    申请日:2014-01-23

    CPC classification number: C12N9/2431 C12N15/70 C12Y302/01026

    Abstract: 本发明公开了一种来自桑螟的β-呋喃果糖苷酶、编码基因、基因载体、菌株及应用。本发明提供的桑螟β-FFase是序列表中SEQ?ID?NO.1所示的由488个氨基酸残基组成的蛋白质。本发明从桑树重要害虫桑螟的中肠转录产物中克隆得到DpSuc1a,该基因在桑螟的中肠高量表达,与表达载体pET-24b连接,转化到BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达,获得了可溶性融合蛋白DpSUC1a,经酶学特性鉴定,重组DpSUC1a具有β-FFase的活性,说明β-FFase是桑螟为害桑树,避免桑树生物碱毒害作用的重要酶蛋白。本发明的基因及其编码蛋白对食桑害虫抵抗桑树生物碱的分子机制研究,以及进一步利用植物转基因RNAi等技术开发新型抗虫靶标具有重要的理论及实际意义,将在桑园害虫防治和增强桑树抗虫性的研究中发挥重要的作用,应用前景广阔。

    一种从蚕体提取的墨蝶呤的鉴定方法

    公开(公告)号:CN102650621A

    公开(公告)日:2012-08-29

    申请号:CN201210133303.1

    申请日:2012-05-02

    Abstract: 本发明公开了一种从蚕体中提取的墨蝶呤的鉴定方法,该方法利用高效液相色谱法,色谱条件为以ODSC18为色谱柱,以甲醇-0.006%乙酸混合液为流动相,流速为1ml/min,柱温为25℃,进样量20ul,检测波长为420nm。按照该色谱条件对所提取的色素进行分析,能够有效地鉴定出目标产物墨蝶呤。本发明具有精密度高、简便、准确、重复性好、稳定性好等优势,为从蚕体提取墨蝶呤的鉴定提供了一种简便、高效,精准的方法。

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