人源线粒体呼吸链超级复合物CICIII2CIV的纯化方法

    公开(公告)号:CN117024606A

    公开(公告)日:2023-11-10

    申请号:CN202311132534.5

    申请日:2023-09-05

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明提供了一种人源线粒体呼吸链超级复合物CICIII2CIV的纯化方法,属于蛋白纯化技术领域。本发明先提供人源线粒体总蛋白溶液,所述人源线粒体总蛋白溶液包括由人源线粒体呼吸链复合物I、III和IV组装而成的人源线粒体呼吸链超级复合物CICIII2CIV,所述人源线粒体呼吸链复合物I的NDUFS3亚基C端融合有3×Flag标签;然后将所述人源线粒体总蛋白溶液依次进行Flag标签亲和柱层析纯化和凝胶排阻柱层析纯化,得到人源线粒体呼吸链超级复合物CICIII2CIV纯品。本发明提供的纯化方法能获得纯度高、产量大且生理活性好的人源线粒体呼吸链超级复合物CICIII2CIV。

    一种表达结核分枝杆菌ATP合成酶的重组菌及其构建方法和表达方法

    公开(公告)号:CN116814670A

    公开(公告)日:2023-09-29

    申请号:CN202310468268.7

    申请日:2023-04-27

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明公开了一种表达结核分枝杆菌ATP合成酶的重组菌及其构建方法和表达方法,属于外源表达技术领域。本发明提供了一种表达结核分枝杆菌ATP合成酶的重组菌的构建方法,以含有辅助基因敲除质粒的耻垢分枝杆菌感受态为基底细胞,先转入带有亲和纯化标签的结核分枝杆菌ATP合成酶基因簇,再敲除耻垢分枝杆菌ATP合成酶基因组,反复传代后收集不含辅助基因敲除质粒的菌株,利用原核表达的方法向该菌株中转入结核分枝杆菌ATP合成酶基因簇,得表达结核分枝杆菌ATP合成酶的重组菌。利用本发明所述构建方法,解决了异源表达必需基因本底基因难以敲除以及多亚基蛋白复合物异源表达杂合复合物形成的问题。

    一种更加稳定的人源蛋白酶体激活因子突变体的构建方法

    公开(公告)号:CN102899329A

    公开(公告)日:2013-01-30

    申请号:CN201210439608.5

    申请日:2012-11-07

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明内容为人源非依赖于泛素化及ATP的一种结构上更加稳定的蛋白酶体激活因子REGgamma突变体REGgammaLinker的构建方法。该方法主要通过分子克隆的手段,分别进行俩次不同的PCR,将原有的REGgamma的60位到107位的氨基酸用六肽Linker(GAVSAG)来取代,从而得到一种更加稳定的突变体。并且对该突变体蛋白进行了原核表达,纯化以及晶体筛选以及结构解析。通过与母体蛋白结构与功能上的实验分析,证明通过该本发明的方法可以获得结构稳定,对蛋白酶体的激活功能没有影响,从而对以后对REGgamma蛋白在生物学上的研究,以及药物开发等方面提供了理论依据。

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