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公开(公告)号:CN112094861B
公开(公告)日:2022-11-22
申请号:CN202011151848.6
申请日:2020-10-26
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/62 , C12P21/02 , C07K14/405 , C07K1/14 , C07K1/34 , C07K1/22 , C07K1/16 , A61K31/352 , A61K47/69
Abstract: 本发明公开了一种绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法及其应用,绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法,包括如下步骤:(1)重组蛋白表达工程菌的构建;(2)重组蛋白的表达和收获;(3)重组蛋白的分离纯化。本发明提供的绿藻植物铁蛋白安全,无毒副作用,还具有良好的补铁效果,在自然界中分布广泛;本发明所得的绿藻植物铁蛋白作为一种新的载体具有很好的应用前景,拓宽了铁蛋白的研究范围;将黄酮类化合物包封在蛋白质内部极大地提高了非水溶性生物活性物质的水溶性、稳定性、生物利用度,提高了生物活性物质在食品,医疗,保健等方面的应用。
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公开(公告)号:CN113801868A
公开(公告)日:2021-12-17
申请号:CN202111085704.X
申请日:2021-09-16
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及檀香烯合酶突变酶及其在合成檀香烯中的应用。具体涉及的突变酶有SanSyn(Q527A)、SanSyn(S533A)、SanSyn(S533Q)、SanSyn(Q527A&S533A),它们分别是将第527位的谷氨酰胺突变为丙氨酸,第533位的丝氨酸突变为丙氨酸、谷氨酰胺以及第527位的谷氨酰胺、533位的丝氨酸均突变为丙氨酸。以葡萄糖为碳源,在宿主大肠杆菌DH5α中合成α‑檀香烯的方法,主要包括构建重组质粒pETDuet‑SanSyn(Q527A)、pETDuet‑SanSyn(S533A)、pETDuet‑SanSyn(S533Q)、pETDuet‑SanSyn(Q527A&S533A)、pMVA;构建大肠杆菌重组菌株,进一步发酵培养,本发明涉及的技术方案显著提高了α‑檀香烯的产量,蛋白可溶性表达也有所提高。为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产α‑檀香烯奠定了基础。对萜烯类合酶的改造工作提供参考。
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公开(公告)号:CN108836994B
公开(公告)日:2021-06-18
申请号:CN201810828725.8
申请日:2018-07-25
Applicant: 南京林业大学
IPC: A61K36/48 , A61K36/13 , A61K36/61 , A61K129/00
Abstract: 本发明属于植物提取技术领域,公开了一种人工林树皮皂苷类活性成分的提取方法,包括如下步骤:1)将纤维素复合酶溶解于乙醇水溶液中获得纤维素复合酶溶液;2)将人工林树皮粉末和纤维素复合酶溶液按照料液质量比为1:6~12的比例混合获得混合料液;3)将所述混合料液置于30~70℃,超声酶解30~80min后,进行固液分离,收集液相组分即为皂苷类活性成分。本发明的酶处理与超声辅助耦合提取,提取的活性成分得率最高,比传统有机溶剂提取方法高20%以上,比超声波提取方法高10%以上,是一种低温、绿色、高效的提取方法。
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公开(公告)号:CN111939273A
公开(公告)日:2020-11-17
申请号:CN201910416454.X
申请日:2019-05-17
Applicant: 南京林业大学
IPC: A61K49/00
Abstract: 本发明公开一种以铁蛋白为载体制备具有肿瘤靶向作用荧光探针的方法,所述铁蛋白载体包含人重链铁蛋白。将笼状结构的人重链铁蛋白解聚为单体状态;向解聚的人重链铁蛋白中加入具有荧光性质的香豆素-6使其与铁蛋白结合;将结合有香豆素-6的所述解聚人重链铁蛋白重新聚合为纳米颗粒。本发明所制备的纳米探针具有生物相容性好,可特异性地在过表达转铁蛋白受体1(TfR1)的肿瘤细胞表面富集,利用香豆素-6的荧光特性为给药系统的体内示踪提供一种高效的检测方法。
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公开(公告)号:CN110423742A
公开(公告)日:2019-11-08
申请号:CN201910698944.3
申请日:2019-07-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种通过磁性铁蛋白表面展示实现酶固定的方法,构建含Ecoil短肽的铁蛋白重组质粒和含Kcoil短肽的酶重组质粒;将构建好的重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株TOP10感受态细胞,获得相应的基因工程菌株;将基因工程菌接种于LB培养基中诱导培养,利用亲和层析和体积排阻色谱得到纯化的铁蛋白与酶;在纯化的铁蛋白内部空腔中合成Fe3O4;将获得的磁性铁蛋白与酶混合,通过Ecoil螺旋肽和Kcoil螺旋肽的相互作用,可形成磁性铁蛋白固定化酶。本发明采用基因融合,与以传统共价键的方式实现酶的固定化相比,避免了酶活性中心的破坏,明显提高了表面展示酶的效果和酶活,也大大降低了成本。
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公开(公告)号:CN105504030B
公开(公告)日:2019-09-20
申请号:CN201511023762.4
申请日:2015-12-30
Applicant: 南京林业大学
IPC: C07K14/245 , C12N15/70 , C12N1/21
Abstract: 本发明公开了一种去除血红素的大肠杆菌铁蛋白突变体及包含它的重组体系。去除血红素的大肠杆菌铁蛋白突变体,其DNA序列如SEQ NO:1所示。与现有技术相比,本发明所提供的去除血红素的大肠杆菌铁蛋白突变体(M52A突变体)具有降低蛋白稳定性和可化学诱导重新获得蛋白稳定性的特性,其四级结构并未发生明显变化,仍为球形壳状结构;野生型铁蛋白Tm(50%蛋白质发生变性的温度)为69.9℃,而突变体M52A的Tm仅为54.3℃,与氯化血红素化学诱导后其Tm恢复为67.7℃,因此,该突变体因其具有可调控的温度稳定性,可作为一种通过小分子诱导控制温度稳定性的蛋白质纳米载体。
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公开(公告)号:CN110075154A
公开(公告)日:2019-08-02
申请号:CN201910479217.8
申请日:2019-06-04
Applicant: 南京林业大学
IPC: A61K36/48 , A61K129/00
Abstract: 本发明提供了一种基于深度共熔溶剂(DESs)从黑荆树树皮中提取皂苷类活性成分的方法,属于植物提取技术领域;所述方法包括以下步骤:1)将深度共熔溶剂的水溶液和黑荆树树皮粉末以5~20mL:1g的液料比混合获得混合料液;2)将步骤1)中所述混合料液置于35~65℃充分溶解20~60min后,进行固液分离,收集上清组分即为皂苷类活性成分;所述深度共熔溶剂为氢键受体和氢键供体的共熔混合物;所述氢键受体为氯化胆碱;所述氢键供体为柠檬酸、葡萄糖和丙三醇中的一种或几种。所述方法提取的皂苷类活性成分得率最高,比传统有机溶剂提取方法高50%以上,比超声波提取方法高30%以上,是一种低温、低耗能、绿色、高效的提取方法。
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公开(公告)号:CN105106039B
公开(公告)日:2019-03-19
申请号:CN201510589294.0
申请日:2015-09-17
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种原花色素美白防晒霜的制备方法,属于护肤品技术领域。目的是为了提供一种原花色素美白防晒霜科学配方及其合理的、高利用率的防晒霜制备方法。本发明由水相和油相按一定重量份数缓慢混合保温,搅拌制成,其中油相组成成分为低聚原花色素,硬脂酸,十六醇,棕榈酸异丙酯,羊毛脂,橄榄油,单硬脂酸甘油酯,尼泊金甲酯,尼泊金丙酯,水。水相组成成分甘油,三乙醇胺,十二烷基硫酸钠,水,氮酮。本发明方法制得的美白防晒霜有效成分是低聚原花色素是一种天然多酚类物质,由大孔树脂分离技术对原花色素纯化提取得到,具有较好的美白防晒功能。
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公开(公告)号:CN109082417A
公开(公告)日:2018-12-25
申请号:CN201810840904.3
申请日:2018-07-27
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 突变修饰的巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶及其制备方法和应用,氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述。通过对P450BM-3单加氧酶基因的定向改造,选择的3个突变点R966L/K972L/W1046H使重组蛋白对辅酶NADH利用效率大为增加,是原酶对辅酶NADH利用效率的2.4倍,酶活达到11415 U/mg。
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